2024-07-31 00:00:00來源：微譜醫(yī)藥技術(shù)服務(wù)瀏覽量：337
《熒光PCR技術(shù)常見困擾專題》進(jìn)入第三篇，繼之前的污染和交叉后，本期我們談?wù)剄PCR實(shí)驗(yàn)的又一個(gè)重要影響因素：抑制物。
熒光PCR的主要功能性成分為DNA聚合酶，常用的為Taq DNA聚合酶。該酶具有5'-3'端DNA聚合酶功能和3'-5'核酸外切酶活性，此外Taq酶還需要有Mg2+作為輔助因子激活。一些常見的生物體液樣本、細(xì)胞/細(xì)菌培養(yǎng)液、疫苗/蛋白/酶發(fā)酵液等樣本含有大量的雜蛋白、無機(jī)鹽和其他化學(xué)試劑。這些試劑如果作為待檢測(cè)樣本，如果無法將上述抑制物去除，輕則會(huì)導(dǎo)致曲線異常，重則會(huì)呈現(xiàn)假陰性結(jié)果。
被抑制的陽性擴(kuò)增曲線和陰性擴(kuò)增曲線如圖1和圖2所示，圖3是一個(gè)無抑制的陽性擴(kuò)增曲線。圖1和圖2顯示了一個(gè)共同的特點(diǎn)就是基線期不平滑且有擴(kuò)增后期上揚(yáng)（非正常擴(kuò)增）的情況出現(xiàn)。
▲ 圖1 | 被抑制的陽性擴(kuò)增曲線
▲ 圖2 | 被抑制的陰性擴(kuò)增曲線
▲ 圖3 | 無抑制的陽性擴(kuò)增曲線
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