所有應(yīng)用于人類臨床的醫(yī)學(xué)解決方案，在研發(fā)和測(cè)試階段都離不開(kāi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。在生物制品的生物安全研究中，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也是其中不可或缺的重要部分?？墒牵绻锇踩珯z定動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)生變更應(yīng)該怎么辦呢？本期技術(shù)共探，我們將帶來(lái)硬核知識(shí)分享！

—— 生物制品外源因子檢測(cè)要求:動(dòng)物體內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)

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2020年《生物制品注冊(cè)受理審查指南（第二部分 治療用生物制品）（試行）》²中3.2.A.2規(guī)定，注冊(cè)申報(bào)需要提交“外源性物質(zhì)的安全性評(píng)估資料”，評(píng)估資料包括風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估資料、病毒清除驗(yàn)證研究資料、檢測(cè)項(xiàng)目與報(bào)告、檢測(cè)方法與驗(yàn)證等資料。對(duì)于生物制品的外源因子檢測(cè)方法要求，可以參考2023年《ICHQ5A (R2)來(lái)源于人或動(dòng)物細(xì)胞系生物技術(shù)產(chǎn)品的病毒安全性評(píng)價(jià)》⁷的指南要求。其中，動(dòng)物體內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)是外源病毒因子檢測(cè)不可或缺的重要部分。

—— 中美雙報(bào)細(xì)胞庫(kù)檢定：動(dòng)物體內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)要求

圖源?| FDA官網(wǎng)

細(xì)胞庫(kù)作為生物制品表達(dá)系統(tǒng)的關(guān)鍵起始原料，對(duì)其外源病毒因子的全面檢測(cè)是各國(guó)法規(guī)的共識(shí)，包括《中國(guó)藥典》2020版三部生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制¹、USP General Tests and Assays: <1237> Virology Test Methods⁶以及中國(guó)食品藥品檢定研究院等發(fā)表的《基因治療產(chǎn)品質(zhì)量控制概述》⁵等。

—— 動(dòng)物體內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)：外源病毒因子檢測(cè)與藥物安全性評(píng)價(jià)

ICHQ5A的附件Table 2⁷非常清晰地向我們展示了病毒的不同檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)和局限性，包括體內(nèi)動(dòng)物接種、體外細(xì)胞共培養(yǎng)、抗體生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)、透射電鏡檢測(cè)、qPCR核酸檢測(cè)以及逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)等。

雖然動(dòng)物體內(nèi)接種能夠敏感識(shí)別活病毒，但是同時(shí)對(duì)于病毒檢測(cè)種類是有限的，可能會(huì)形成干擾。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的篩選、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作、實(shí)驗(yàn)操作等都可能會(huì)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。

外源病毒因子動(dòng)物體內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)的問(wèn)題如下表2所示，從而指向樣品的陽(yáng)性結(jié)果。

表2

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響因素較多，所以在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、動(dòng)物篩選、實(shí)驗(yàn)操作、飼養(yǎng)管理、人員培訓(xùn)等方面都需要全面質(zhì)控，以降低系統(tǒng)性的累計(jì)誤差。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不只是在外源病毒因子的檢查方面，對(duì)于非臨床的動(dòng)物模型、藥理毒理安全評(píng)價(jià)、藥效概念驗(yàn)證等更加重要。2022年6月CDE發(fā)布《基于動(dòng)物法則的藥物注冊(cè)技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見(jiàn)稿）》⁴，以促進(jìn)藥物研究中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的規(guī)范性，從而產(chǎn)生更加客觀真實(shí)的研究結(jié)果，更好地指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)。

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—— 生物制品外源因子檢定與藥物生產(chǎn)工藝變更：動(dòng)物體內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)變更管理

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是指示藥物安全性如外源因子的檢測(cè)方法，同時(shí)也是指示藥物有效性如效價(jià)測(cè)定的檢測(cè)方法。對(duì)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的變更，一直是法規(guī)的重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象。如2021年NMPA發(fā)布《已上市生物制品藥學(xué)變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》³，其中將藥物活性質(zhì)量控制方面的動(dòng)物檢測(cè)場(chǎng)地變更列為重大變更，需要說(shuō)明變更理由，詳述變更檢定場(chǎng)地信息，包括名稱（全稱）、地址（具體到廠房/車間）和功能等，并且必須提供支持方法學(xué)轉(zhuǎn)移的技術(shù)資料。

2023年，F(xiàn)DA也發(fā)布了行業(yè)指南草案《人類細(xì)胞和基因治療產(chǎn)品的生產(chǎn)變化和可比性》⁸，對(duì)于CGT領(lǐng)域產(chǎn)品的變更評(píng)估更加嚴(yán)格，特別是符合21CFR第211部分的在研產(chǎn)品和許可產(chǎn)品，需要在嚴(yán)格的質(zhì)量體系下進(jìn)行包括動(dòng)物模型進(jìn)行的定量研究，以證明產(chǎn)品具有預(yù)期的生物效應(yīng)，并為變更前和變更后產(chǎn)品的可比生物活性提供支持性證據(jù)。

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來(lái)源：FDA《人類細(xì)胞和基因治療產(chǎn)品的生產(chǎn)變化和可比性》