2025-06-10 00:00:00來(lái)源：微譜生物科技瀏覽量：271
為什么蛋白中會(huì)有硫酸葡聚糖殘留？什么方法測(cè)定殘留含量更高效準(zhǔn)確？硫酸葡聚糖是一種聚陰離子衍生物。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，通過(guò)添加適量的平均分子量為8000Da的硫酸葡聚糖可以有效抑制蛋白質(zhì)與細(xì)胞的結(jié)團(tuán)，從而顯著提高蛋白產(chǎn)率。但硫酸葡聚糖具有引發(fā)結(jié)腸炎的副作用，因此在蛋白純化過(guò)程中需要將硫酸葡聚糖去除并監(jiān)控其殘留量。本期技術(shù)共探，我們將共同剖析測(cè)定硫酸葡聚糖殘留含量的難點(diǎn)，共同探索破解難題的優(yōu)選方法！
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不同分子量蛋白質(zhì)的干擾
硫酸葡聚糖的平均分子量為8000Da，一般采用體積排阻色譜柱，但蛋白原料藥中含有相近分子量的蛋白干擾葡聚糖的檢測(cè)。另外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法雖然具有高靈敏度，但是專屬性較差，且效率低。
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方法靈敏度低
硫酸葡聚糖在200~800nm波長(zhǎng)下的低響應(yīng)導(dǎo)致方法的靈敏度較差，亦是制約HPLC法用于蛋白樣品中葡聚糖低殘留量檢測(cè)的重要因素。
▲?圖?| 微譜生物制品質(zhì)量研究實(shí)驗(yàn)室
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供試品中分子量相近蛋白干擾
通過(guò)酸化沉淀技術(shù)對(duì)蛋白原料藥樣品進(jìn)行前處理，實(shí)現(xiàn)蛋白與硫酸葡聚糖的分離，以體積排阻色譜柱的高效液相色譜法再次分離蛋白原料藥樣品中的硫酸葡聚糖，從而解決相近分子量蛋白的干擾。
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提高方法靈敏度
柱前衍生的方法，通常比較復(fù)雜，耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，效率較低。
我司采用柱后衍生法使葡聚糖與衍生試劑反應(yīng)生成在可見光范圍內(nèi)具有強(qiáng)吸收的衍生物，從而解決蛋白質(zhì)原料藥的干擾及響應(yīng)低的問(wèn)題，分析方法的檢測(cè)限通常可做到10ppm以下。
▲?圖?| 微譜生物制品質(zhì)量研究實(shí)驗(yàn)室
采用高效液相色譜方法，經(jīng)柱后衍生測(cè)定蛋白樣品中葡聚糖殘留量。經(jīng)方法確認(rèn)，該方法具有較好的專屬性、靈敏度、線性和準(zhǔn)確度。
專屬性附圖如下：
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