這段視頻主要介紹了使用微流控調(diào)制光譜(MMS)技術(shù)研究SAM-I核糖開關(guān)的結(jié)構(gòu)變化。研究人員選擇SAM-I核糖開關(guān)作為非專有靶標(biāo)和對(duì)照RNA進(jìn)行分析。他們首先展示了SAM-I核糖開關(guān)的三維結(jié)構(gòu),解釋了SAM分子如何與核糖開關(guān)結(jié)合,導(dǎo)致P1和P4結(jié)構(gòu)域的構(gòu)象變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SAM與SAM-I核糖開關(guān)的結(jié)合親和力約為150±80納摩爾,與文獻(xiàn)報(bào)道的50納摩爾在實(shí)驗(yàn)誤差范圍內(nèi)一致。研究人員通過(guò)劑量依賴性實(shí)驗(yàn)觀察到了隨SAM濃度增加而產(chǎn)生的RNA結(jié)構(gòu)變化,這些變化在光譜中呈現(xiàn)出獨(dú)特的"彩虹般"模式。 MMS技術(shù)展現(xiàn)了其在檢測(cè)特定堿基構(gòu)象變化方面的優(yōu)勢(shì)。研究人員觀察到了多處光譜變化,包括1710 cm?1處胞嘧啶構(gòu)象的改變,1695 cm?1處可能來(lái)自尿嘧啶的群體變化,以及從1603 cm?1到1607 cm?1的峰位移。這些變化反映了RNA結(jié)構(gòu)隨SAM濃度增加而發(fā)生的變化。 研究人員指出,MMS技術(shù)在RNA結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用與NMR化學(xué)位移擾動(dòng)有相似之處,但MMS在樣品需求量和檢測(cè)靈敽度方面具有一定優(yōu)勢(shì)。盡管MMS在測(cè)量緊密結(jié)合相互作用的KD值方面存在一些限制,但研究人員認(rèn)為它仍然是基于片段的藥物發(fā)現(xiàn)的有力工具,特別是考慮到藥物片段通常具有較高的KD值。 最后,研究團(tuán)隊(duì)報(bào)告他們已經(jīng)成功將MMS技術(shù)應(yīng)用于五種不同的RNA結(jié)構(gòu),包括含有四向結(jié)、假結(jié)、G四鏈體和凸環(huán)的RNA結(jié)合位點(diǎn)。在所有這些靶標(biāo)中,他們都觀察到了因配體結(jié)合而引起的結(jié)構(gòu)變化,盡管不同配體的效果有所不同。這一結(jié)果表明MMS技術(shù)在RNA研究中具有廣泛的適用性,為RNA-配體相互作用研究和RNA靶向藥物開發(fā)提供了一種有前景的新工具。