CGT作為最新的生物藥品比起重組蛋白、單抗等成熟生物制品在生物安全性控制方面具有更大的工藝復(fù)雜性及產(chǎn)品獨(dú)特性。除了產(chǎn)品生產(chǎn)的源頭為不同種類的細(xì)胞外、工藝的多樣性導(dǎo)致往往很難對于每個(gè)產(chǎn)品的生物安全性控制策略采取標(biāo)準(zhǔn)化一刀切的判斷方式。產(chǎn)品開發(fā)者必須按照對于原始細(xì)胞株來源與制備過程的了解，及目標(biāo)市場藥監(jiān)及其他監(jiān)管機(jī)構(gòu)的要求做全面的風(fēng)險(xiǎn)評估，然后按照風(fēng)險(xiǎn)的嚴(yán)重等級采取系統(tǒng)化的控制。生物安全風(fēng)險(xiǎn)分成幾大類，其中最復(fù)雜的、尤其是針對CGT產(chǎn)品而言是病毒安全性控制。

生物制品的病毒污染風(fēng)險(xiǎn)分成內(nèi)源病毒、外源病毒、輔助病毒。其中、內(nèi)源病毒為生產(chǎn)體系從設(shè)計(jì)而自帶的病毒風(fēng)險(xiǎn)，外源病毒為生產(chǎn)過程中可能引進(jìn)的病毒風(fēng)險(xiǎn)。由于CGT產(chǎn)品的原始細(xì)胞株一般是人源或猴源的細(xì)胞株、包括293系列、Vero、iPSC、間充質(zhì)干細(xì)胞等，每一種又有不同細(xì)分來源，生物藥行業(yè)對于這些細(xì)胞系的安全性研究總體來說還不夠全面、所以這些病毒對于生產(chǎn)車間人員及臨床實(shí)驗(yàn)供試者的潛在生物安全危害必須要通過大量質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)評估基礎(chǔ)上的合適病毒檢測來證明可以得到有效控制。與其它傳統(tǒng)生物制品的共性之一，是CGT產(chǎn)品的細(xì)胞株及GMP細(xì)胞庫開發(fā)及擴(kuò)增過程中大多會用到動物來源的關(guān)鍵物料，比如胎牛血清（牛源）以及胰酶（豬源）等，由此帶來一些動物源性的病毒因子到終產(chǎn)品并通過給藥渠道被輸送至使用者體內(nèi)，從而會導(dǎo)致相關(guān)傳染性疾病的發(fā)生，這個(gè)后果除了給患者造成身體損害，也給生物制藥生產(chǎn)企業(yè)造成巨大壓力以及經(jīng)濟(jì)損失。所以，CGT產(chǎn)品所牽涉的主細(xì)胞庫（MCB）、工作細(xì)胞庫（WCB）、終末細(xì)胞（EOPC）及純化前上清液（UPB）都需要做嚴(yán)格的病毒檢測。除此以外，生物制品及其相關(guān)生產(chǎn)基質(zhì)及中間產(chǎn)品等也需要進(jìn)行行之有效的病毒檢測，所有這些檢測是生物制藥行業(yè)質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。細(xì)胞庫只有完成這些檢測后才能用于GMP生產(chǎn)。

最新的ICHQ5A(R2)對于生物制品的細(xì)胞庫檢測列出以下幾大類（附圖Table1）：CGT產(chǎn)品研究者必須針對自身產(chǎn)品的起始細(xì)胞株來源、構(gòu)建、培養(yǎng)過程及細(xì)胞庫建設(shè)的環(huán)境、物料及其他流程來評判內(nèi)源病毒、外源病毒、輔助病毒的種類和污染風(fēng)險(xiǎn)，并對于可能有的病毒在最終CGT產(chǎn)品中存在與否、及數(shù)量多少進(jìn)行科學(xué)及檢測方法學(xué)的研究，檢測方法必須通過驗(yàn)證證明其專屬性和靈敏度能夠達(dá)到保障生物制品生物安全性的要求。

其中需要特別指出的是，在ICHQ5A（R2）專門針對NGS方法進(jìn)行了說明。具體如下： NGS（也稱為高通量測序）可用于廣泛的病毒檢測。NGS可以提供確定的病毒檢測靈敏度和廣度，并可以減少動物使用和測試時(shí)間。對于使用的任何NGS方法，應(yīng)提供驗(yàn)證包以支持其在應(yīng)用中的使用。這包括方法驗(yàn)證和分析方法確認(rèn)或基質(zhì)特異性的確認(rèn)（視情況而定）。基于潛在的安全問題，生物信息學(xué)分析可以針對特定病毒，也可以針對未知病毒檢測。NGS可以用廣譜病毒檢測來替代體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，以檢測未知或未曾預(yù)見的病毒種類。NGS還可以補(bǔ)充或替代體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)，以檢測已知和未知或未曾預(yù)見的病毒種類。此外，該測定也可用于檢測已知病毒，并且它可替代HAP、MAP和RAP試驗(yàn)以及其他病毒特異性PCR測定。

NGS 的使用可在以下情形下被特別考慮：檢測或表征細(xì)胞基質(zhì)或細(xì)胞庫中已知和未知病毒，病毒種子或者病毒收獲液中由于沒有有效的中和載體病毒措施而對檢測產(chǎn)生干擾時(shí)，或者產(chǎn)品本身毒性或培養(yǎng)基組分存在毒性時(shí)。

ICHQ5A R2 Table 1. Virus Tests Recommended to Be Performed Once at Various Cell Levels  （建議在不同細(xì)胞水平進(jìn)行一次病毒檢測）

a. 應(yīng)按上表所述對每個(gè)WCB進(jìn)行外源病毒測試。適當(dāng)時(shí)，如果在MCB上進(jìn)行了外源病毒檢測，并且培養(yǎng)至LIVCA或LIVCA以上的細(xì)胞來自WCB并用于檢測外源病毒的存在，則可省略對初始WCB的類似檢測。通常不建議WCB進(jìn)行抗體產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)。在每個(gè)WCB上而不是在MCB上進(jìn)行完整檢測的替代方案也是可以接受的。

b. 限定代次細(xì)胞：用于生產(chǎn)的達(dá)到培養(yǎng)限定代次的細(xì)胞（Cells at the Limit of In Vitro Cell Age Used for Production）

c. 也可能檢測到其他病毒

d. 如果已知一種細(xì)胞系組成性地產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒，則可能不需要該檢測

e. 適用于已知已被此類病毒感染過的細(xì)胞系

f. 體外病毒檢測直接在WCB或直接源自該WCB的LIVCA細(xì)胞上進(jìn)行。基于風(fēng)險(xiǎn)評估，使用NGS進(jìn)行病毒檢測可以用作體外檢測（細(xì)胞培養(yǎng)法和PCR法）的補(bǔ)充或替代檢測

g. 可根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評估進(jìn)行體內(nèi)法檢測。然而，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對于表征良好的細(xì)胞系是非必須的，如CHO、NS0和SP2/0，具體需要根據(jù)細(xì)胞系歷史，先驗(yàn)知識以及其他基于風(fēng)險(xiǎn)的考慮。這包括原始（親本）未轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的體內(nèi)病毒試驗(yàn)或NGS試驗(yàn)以及從原始細(xì)胞庫衍生MCB的控制。還應(yīng)考慮對來自同一原始細(xì)胞庫的其他MCB進(jìn)行病毒安全性測試的先驗(yàn)知識，包括用于建立MCB的方法。如果第一個(gè)WCB或后續(xù)WCB是在批準(zhǔn)的受控條件下準(zhǔn)備的，則通常不需要進(jìn)行測試。對于LIVCA的細(xì)胞，基于先前的知識和其他基于風(fēng)險(xiǎn)的考慮，可能不需要進(jìn)行測試。如果殘留風(fēng)險(xiǎn)仍然存在，可以考慮保留體內(nèi)檢測或用檢測廣泛病毒的分子生物學(xué)方法（如NGS或PCR）替換，以檢測可能在MCB建立期間或LIVCA階段細(xì)胞培養(yǎng)期間引入的病毒。

h. 例如MAP、RAP、HAP，其通常適用于嚙齒動物細(xì)胞系。病毒特異性PCR或靶向分子方法可以用作動物試驗(yàn)的替代

i. 例如基于細(xì)胞系的起源和歷史，包括相關(guān)的原材料和試劑

j. 適用時(shí)，應(yīng)考慮使用NGS替代體內(nèi)試驗(yàn)，并可根據(jù)試驗(yàn)適用性和風(fēng)險(xiǎn)評估，用于補(bǔ)充或替代體外試驗(yàn)和其他病毒特異性試驗(yàn)

CGT產(chǎn)品常見的內(nèi)源病毒包括逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒、慢病毒等，每一種的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)不同、檢測方法也都有所不同、有的病毒需要2-3種不同方法結(jié)合使用才能完成安全性檢測。慢病毒在CGT上市產(chǎn)品中既被當(dāng)作最終產(chǎn)品、又廣泛被當(dāng)作基因編輯的載體來用，慢病毒的最大生物安全性風(fēng)險(xiǎn)是在細(xì)胞庫構(gòu)建及生產(chǎn)工藝步驟中產(chǎn)生載體部件重組、造成野生型可復(fù)制性慢病毒(RCL)的產(chǎn)生，從而對受試者的安全造成嚴(yán)重后果。所以，可復(fù)制性慢病毒RCL檢測是中美歐藥監(jiān)機(jī)構(gòu)統(tǒng)一要求并強(qiáng)調(diào)的生物安全性檢測項(xiàng)。

隨著CGT生產(chǎn)用物料來源的多樣性和非GMP級別特質(zhì)，工藝的非標(biāo)準(zhǔn)化，行業(yè)多處于臨床早期階段，如何正確判斷外源病毒因子的污染風(fēng)險(xiǎn)尤其具有挑戰(zhàn)，企業(yè)必須具有技術(shù)和質(zhì)量專業(yè)人員能夠結(jié)合法規(guī)、指南要求來系統(tǒng)分析所用細(xì)胞株/細(xì)胞庫涉及的具體供應(yīng)鏈生產(chǎn)全流程從而制定對于外源病毒檢測的方案，然后開展方法學(xué)研究和驗(yàn)證等，才能對細(xì)胞庫進(jìn)行放行前所需做的檢測并結(jié)果符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。CGT產(chǎn)品與傳統(tǒng)重組蛋白如單抗等在檢測樣品種類方面有著本質(zhì)上的區(qū)別，傳統(tǒng)重組蛋白所最常用的CHO細(xì)胞系的病毒檢測經(jīng)驗(yàn)不能簡單套用，例如，細(xì)胞混合液和病毒上清等在檢測時(shí)如何處理都是復(fù)雜的問題，不能輕易套用重組蛋白的方法學(xué)，否則會出現(xiàn)假陰性或假陽性的檢測結(jié)果，造成產(chǎn)品安全性風(fēng)險(xiǎn)。所以，CGT檢測技術(shù)的個(gè)性化和試用性考察不容忽視。外源病毒檢測方法又分體外和體內(nèi)檢測兩大類：體外檢測方法根據(jù)細(xì)胞株/庫的來源分成一般、牛源、豬源、人源、猴源等病毒檢測，每一種種屬又分成多種病原體與指示細(xì)胞的合理組合和對應(yīng)反應(yīng)的測定來最終完成，可謂復(fù)雜的系統(tǒng)工程；傳統(tǒng)的體內(nèi)檢測方法一般會用到幾種不同的動物類型及胚胎與病原體的結(jié)合。完成體內(nèi)體外病毒檢測需要長期的生物藥產(chǎn)業(yè)化經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)平臺的搭建、實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的合規(guī)性必須從實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)、質(zhì)量體系（需要GMP）、人員資質(zhì)、檢測細(xì)胞來源及質(zhì)量控制、試劑耗材管理等多方面達(dá)到藥監(jiān)機(jī)構(gòu)要求，在這些前提下的檢測方法及方法驗(yàn)證和檢測數(shù)據(jù)才能被監(jiān)管機(jī)構(gòu)認(rèn)可作為可以用來做CGT臨床或商業(yè)化樣品GMP生產(chǎn)的原始細(xì)胞庫。

由于生物制品細(xì)胞庫，尤其是CGT產(chǎn)品的細(xì)胞庫的生物安全性保障直接關(guān)系到最終產(chǎn)品的生物安全性，而病毒的風(fēng)險(xiǎn)尤其復(fù)雜，需要高度專業(yè)性團(tuán)隊(duì)的支持。另外，用于多種病毒檢測的活病毒對于CGT生產(chǎn)企業(yè)的設(shè)施設(shè)備有直接污染風(fēng)險(xiǎn)、歐美生物制藥企業(yè)和市場一般對于細(xì)胞庫的檢測采用委托第三方有資質(zhì)及有經(jīng)驗(yàn)的服務(wù)方來完成。制藥企業(yè)在選擇第三方檢測公司時(shí)務(wù)必要關(guān)注以上所提及的所有要求，以避免因?yàn)榈谌綑z測實(shí)驗(yàn)室不合規(guī)或技術(shù)不成熟造成的病毒檢測缺陷項(xiàng)。

中國CGT行業(yè)細(xì)胞庫的檢測服務(wù)商目前所面臨的3個(gè)主要挑戰(zhàn)來自于：1）技術(shù)方面的挑戰(zhàn)，外源病毒檢測對于不同產(chǎn)品的需求復(fù)雜及多樣化，目前主要CGT產(chǎn)品種類的病毒檢測涉及超過近70種常用內(nèi)外源病毒的檢測方法；2)法規(guī)方面的挑戰(zhàn)，以中、美藥監(jiān)機(jī)構(gòu)對于體外法外源病毒因子檢測基本思路是一致的，但是在用于各自區(qū)域申報(bào)時(shí)，涉及到檢測用的具體病毒和指示細(xì)胞種類是有區(qū)別的，這個(gè)狀況讓一些有意在中、美同時(shí)申報(bào)的生物制藥企業(yè)面臨著比較糾結(jié)的局面；3)GMP執(zhí)行不到位，藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)對于生物制品的監(jiān)管愈加嚴(yán)格，細(xì)胞庫放行檢測中任何GMP合規(guī)執(zhí)行的不到位，都會導(dǎo)致制藥企業(yè)前期辛苦的研發(fā)前功盡棄。因此，選擇合適的有資質(zhì)的供應(yīng)商將對CGT產(chǎn)品質(zhì)量安全和海外申報(bào)的順利與否產(chǎn)生重要的影響。