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CDE文章 | 化學藥品注射劑的滅菌或無菌工藝現(xiàn)行要求及考慮

2023-12-20 16:43:52來源：注冊圈瀏覽量：2381

摘要

化學藥品注射劑是臨床上應用較廣的一類無菌藥品，鑒于其較高的安全性風險，確保注射劑的無菌性尤為關鍵。結合中國、美國和歐盟對注射劑的無菌保障監(jiān)管及藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）指南的現(xiàn)行要求，進一步探討化學藥品注射劑的滅菌或無菌工藝控制。目前，我國化學藥品注射劑的滅菌或無菌工藝選擇要求與歐美國家基本一致，美國和歐盟對于濕熱滅菌注射藥品已實施參數(shù)放行。通過闡述注射劑滅菌或無菌工藝的評估及研究，為制藥企業(yè)化學藥品注射劑無菌保障控制策略及無菌風險管控的不斷完善提供參考，以更好地提高注射劑的無菌保障。

化學藥品注射劑是一類廣泛應用于臨床的無菌藥品，常用劑型包括注射液和注射用無菌粉末等。注射劑通過靜脈或肌肉注射快速進入體循環(huán)，具有臨床起效迅速等特性，因此也成為安全風險較高的劑型，2022年度國家藥品不良反應監(jiān)測報告顯示注射給藥不良反應事件報告占比高達55.1%。美國食品藥品管理局（FDA）關于注射劑的無菌保證缺陷曾發(fā)出多起警告信，注射劑的無菌保障一直是國內(nèi)外藥品監(jiān)管機構審評和核查的重點。

2020年中國公立醫(yī)療機構化藥注射劑銷售規(guī)模超過5 000億元，全面提升我國注射劑質(zhì)量，規(guī)范注射劑生產(chǎn)過程的無菌保障，確?；瘜W無菌注射劑的安全性至關重要。國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心2020年發(fā)布的《化學藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價技術要求》和《化學藥品注射劑滅菌和無菌工藝研究及驗證指導原則（試行）》，提出了化學藥品注射劑評價的研究思路和滅菌或無菌工藝相關技術要求。國家藥品監(jiān)督管理局食品藥品審核查驗中心于2023年出版了《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）第2版，無菌制劑分冊新增脂質(zhì)體和預灌封注射劑產(chǎn)品、一次性使用技術和免洗物料等內(nèi)容。美國FDA及歐盟委員會（EC）關于藥品的無菌保障已發(fā)布并實施相關法規(guī)及GMP要求，EC于2022年8月更新了GMP《附錄1：無菌藥品的生產(chǎn)》等。本文通過梳理中國、美國和EC對注射劑無菌保障的現(xiàn)行要求，進一步探討化學注射制劑的滅菌或無菌工藝要求及控制要點，為國內(nèi)制藥企業(yè)合理制定化學藥品注射劑無菌保障的控制策略提供參考。

一

化學藥品注射劑的滅菌或無菌工藝要求

注射液一般由原料藥和適宜輔料經(jīng)配制、過濾、灌封、滅菌等工藝步驟制備而成。注射用無菌粉末一般采用無菌分裝或冷凍干燥法制得。嚴格來講包括注射劑在內(nèi)的無菌藥品應不含任何活的微生物，藥品的無菌檢測無法真實反映產(chǎn)品的無菌保證水平，注射劑的無菌性需要通過合理的滅菌或無菌工藝設計及工藝驗證予以保證。注射劑的滅菌或無菌工藝是制劑無菌保障的關鍵，藥品滅菌后微生物存在的概率則采用無菌保證水平（SAL）來表征，該值越小表明產(chǎn)品中微生物存在的概率越低。

1.1 美國

FDA于1976年頒布大容量注射劑制造、加工、包裝或儲存的生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，首次提出對注射劑生產(chǎn)過程尤其是滅菌工藝開展驗證。2004年FDA發(fā)布了通過無菌工藝生產(chǎn)無菌藥品的《現(xiàn)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（c GMP)[7]，指出無菌藥品的生產(chǎn)主要通過終端滅菌或無菌工藝，其中終端滅菌采用濕熱滅菌法、放射法或環(huán)氧乙烷法。由于無菌檢驗的局限性，制藥行業(yè)及藥品監(jiān)管部門實施參數(shù)放行的探索，2012年FDA發(fā)布《濕熱終端滅菌注射藥品的參數(shù)放行指南》，中國目前暫未實施參數(shù)放行。參數(shù)放行是依靠過程控制代替成品檢驗的放行方法，以無菌保證的控制策略可靠性為基礎，該方法不適用于通過過濾除菌、輻射、干熱或環(huán)氧乙烷滅菌的產(chǎn)品，同時參數(shù)放行法要求生產(chǎn)企業(yè)具備良好的無菌保障控制并且該產(chǎn)品需獲得FDA上市批準且市場在售。

現(xiàn)行《美國藥典》（USP）通則“1211：無菌保障”明確無菌藥品的生產(chǎn)工藝包括終端滅菌、無菌工藝或無菌工藝后終端滅菌，終端滅菌工藝需要達到非無菌概率（PNSU）≤1×10-6的要求。此外USP通則“1229：藥品的滅菌方法”對蒸汽滅菌、水溶液濕熱滅菌、干熱滅菌、輻射滅菌、生物指示劑等提供了詳細的闡述。“1222：終端滅菌產(chǎn)品的參數(shù)放行”指出放行參數(shù)需要對滅菌關鍵質(zhì)量屬性和過程參數(shù)進行控制，包括過濾器的完整性、溶液配制和灌裝保持時間、原輔料和包材等的生物負荷、容器密封性等，另外需要基于風險評估制定關鍵參數(shù)，以確保每個生產(chǎn)批次均能達到所需的SAL。

FDA的c GMP詳細闡述了無菌工藝及驗證等內(nèi)容，指南說明僅當終端滅菌不可行時才可采用無菌工藝生產(chǎn)無菌藥物，同時說明培養(yǎng)基模擬灌裝應結合生產(chǎn)線潛在的污染風險進行綜合評估。FDA建議結合最差生產(chǎn)條件對無菌生產(chǎn)操作進行模擬，并且在生產(chǎn)線初始確認期間至少進行3次連續(xù)的驗證，隨后每條生產(chǎn)線開展常規(guī)半年度確認以評估無菌工藝的控制狀態(tài)，將有代表性的每次輪班和轉(zhuǎn)換班的活動及干預納入半年度確認方案，每次產(chǎn)品或生產(chǎn)線的變更都應進行無菌評估。培養(yǎng)基模擬灌裝研究需要將無菌操作持續(xù)時間列為主要考慮因素，操作模擬的持續(xù)時間通常應不少于實際生產(chǎn)過程，盡可能模擬操作者產(chǎn)生的污染危險。對于具有冷凍干燥的工藝操作，指南建議在模擬過程中將未密封的容器暴露在不完全打開的腔室。對于灌裝量通?？山邮艿臄?shù)量為5000～10000支，當灌裝量低于5000支時，培養(yǎng)基模擬灌裝的數(shù)量應至少等于生產(chǎn)線的最大生產(chǎn)批量。另外微生物培養(yǎng)基一般選用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，在特殊環(huán)境中可考慮使用厭氧菌生長培養(yǎng)基（如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基），培養(yǎng)溫度通常不超出20～35℃，培養(yǎng)時間應不少于14d。對于除菌過濾法應開展最差生產(chǎn)條件下的微生物挑戰(zhàn)及濾器完整性實驗。生產(chǎn)工藝的控制應最大限度減少未過濾藥品的微生物負載，過濾除菌通常選用0.2μm的濾器、采用缺陷假單胞菌Brevundimonas diminuta ATCC 19146（平均直徑0.3μm）進行挑戰(zhàn)研究等。

美國注射劑協(xié)會（PDA）于2023年2月發(fā)布了第90號技術報告《藥品生產(chǎn)中的污染控制策略開發(fā)》[10]，該報告對無菌藥物、低生物負荷原料藥和易受污染的非無菌藥物生產(chǎn)中的污染控制實踐進行了闡述，為確保工藝性能和產(chǎn)品質(zhì)量對微生物、熱原和微粒制定了控制措施。對于無菌藥品需通過對設施、設備和生產(chǎn)工藝的設計和確認，以控制微生物負荷；制定污染控制包括人員和物料進入生產(chǎn)區(qū)、人員著裝、設施清潔和消毒、設備消毒等；檢測設備等的日常檢查等；同時終端滅菌的SAL為1×10-6；最終過濾點應盡可能靠近灌裝針；避免增加無菌待包裝藥品污染風險（如貯存在低分類區(qū)域或保持時間較長等）；除菌過濾器的完整性測試；開展彈性密封組件和玻璃容器可見異物檢測及藥品包裝完整性測試等。

1.2 歐盟

歐洲藥品管理局（EMA)2019年發(fā)布了《藥品、活性物質(zhì)、輔料和內(nèi)包材滅菌指南》，該指南為無菌藥品選擇滅菌方法提供了指導，同時指南更新了滅菌決策樹。EMA指南指出滅菌方法的選擇應基于風險評估，終端滅菌提供的無菌保障性優(yōu)于過濾除菌法，建議采用終端滅菌法進行滅菌，對于活性成分、輔料及包材的滅菌應盡可能在完成包裝步驟后再滅菌，以降低污染的風險。

該指南明確對于過度殺滅法的滅菌需要溫度≥121℃，標準滅菌時間（F0)>12 min；濕熱滅菌要求最低F0≥8 min和110℃的最低工藝保持溫度，保證SAL≤1×10-6，同時說明滅菌前的生物負荷需要滿足相應要求。對于除菌過濾法需使用0.22μm或更小孔徑的過濾器，濾器的截留能力、與溶液的相容性及濾器完整性均應進行驗證，同時應確保過濾前每100毫升藥液的生物負荷不超過10菌落形成單位（CFU）。無菌生產(chǎn)工藝應確認藥液灌裝前的放置時限和灌裝時限，如超過24 h建議開展風險評估并提供支持性依據(jù)；同時應采用無菌內(nèi)包裝材料，采用吹灌封技術的產(chǎn)品還應確認容器的無菌性，并且提供容器制造材料的生物負荷控制資料。

歐洲藥典（EP）通論指出無菌藥品的SAL應≤1×10-6，滅菌工藝的選擇應盡可能選擇無菌保障能力高的終端滅菌，對于無法進行終端滅菌的可采用除菌過濾法。另外說明采用經(jīng)充分驗證的濕熱、干熱或電離輻射滅菌的終端滅菌方法可進行參數(shù)放行。

EC在1971年首次頒布無菌GMP附錄，2022年8月發(fā)布更新的GMP《附錄1：無菌藥品的生產(chǎn)》，并于2023年8月25日實施生效。該指南為無菌藥品的生產(chǎn)提供指導，體現(xiàn)了EC監(jiān)管當局對于無菌保障的現(xiàn)行要求，相較之前的版本以及中國和美國的要求更加全面和細化。EC指南指出無菌產(chǎn)品的生產(chǎn)應盡量降低微生物、微粒和內(nèi)毒素或熱原污染的風險。對于成品應使用經(jīng)驗證且受控的滅菌工藝進行最終滅菌，滅菌工藝參數(shù)需進行控制、監(jiān)測和記錄。對于產(chǎn)品滅菌方法未納入現(xiàn)行藥典或非單一水溶液產(chǎn)品的滅菌方法，應盡量選擇加熱滅菌法。滅菌工藝應結合最大裝載和最小裝載進行驗證，應基于風險評估進行滅菌工藝驗證周期的確認，同時做好滅菌記錄。對于滅菌后的物料如果未在滅菌后立即使用，則應采用適當密封的包裝貯存，并應確定最長放置時間。采用濕熱滅菌法，當從滅菌柜中取出所有裝載的物品時應確保干燥，并作為滅菌工藝的內(nèi)容。對于能夠進行預真空滅菌循環(huán)的高壓滅菌釜，應在整個滅菌過程中記錄腔室排水口的溫度，在線蒸汽滅菌系統(tǒng)，應記錄滅菌過程冷凝水排放點的溫度。同時最終滅菌產(chǎn)品的灌裝應至少在C級環(huán)境中進行，當污染控制策略確定環(huán)境對產(chǎn)品污染的風險比較大時，例如灌裝速度慢，容器寬口徑、或需暴露數(shù)秒后方可封裝，則產(chǎn)品應在至少C級背景的A級下灌封。污染控制策略的考慮因素包括廠房和工藝的設計、設備、人員、原輔料的控制、產(chǎn)品的密封性、工藝風險、工藝驗證、清潔消毒、系統(tǒng)監(jiān)測等。另外，明確目檢不能作為容器完整性的檢查方法，應對包括吹灌封（BFS）、成型灌封（FFS）、小容量注射用和大容量注射用軟袋、玻璃安瓿瓶或塑料安瓿瓶等熔融密封的包材完整性進行有效控制和監(jiān)測，其中熔融密封的玻璃安瓿瓶、BFS單元和小容量容器（≤100 m L）應使用經(jīng)驗證的方法進行100%完整性檢查。此外在真空條件下密封的容器應在放行前以及貨架期內(nèi)進行真空度維持測試。

另外，對于不能采用終端滅菌的產(chǎn)品采用過濾除菌法，在生產(chǎn)工藝過程中建議使用多個預過濾器或除菌級過濾器，以確保液體在經(jīng)過最終除菌過濾器之前生物負荷低且受控。由于除菌過濾工藝相較于終端滅菌工藝具有潛在的額外風險，應考慮除菌過濾器靠近灌裝位置。同時進行過濾器的完整性測試及壓差檢測等，并合理設置過濾參數(shù)。

EC指南明確除菌級過濾器應在單個批次使用后更換，同一過濾器不應連續(xù)使用超過1個工作日。無菌工藝模擬應盡可能模擬日常無菌生產(chǎn)工藝，需要模擬正常無菌生產(chǎn)中斷（如空轉(zhuǎn)、換班、配藥容器填料、引入額外設備等）；對于無菌生產(chǎn)過程存在惰性氣體的情形，除需要模擬厭氧條件，否則應在模擬過程中用空氣代替惰性氣體。對于無菌原料藥，應有充足的批量，模擬驗證日常操作及模擬最差情況下的干預操作，并覆蓋可能與無菌產(chǎn)品的所有接觸。無菌驗證需要開展3個連續(xù)批次的驗證，每個灌裝線每半年進行1次驗證，如產(chǎn)品停產(chǎn)應在啟動生產(chǎn)前重新進行驗證。對于采用凍干工藝的產(chǎn)品應確保凍干設備的無菌性并進行驗證，同時需要明確凍干機的裝載方式，凍干設備及器具的滅菌周期依據(jù)污染風險開展評估。

此外，GMP《附錄17：實時放行檢測和參數(shù)放行》說明風險管理是實施參數(shù)放行的必要條件，工藝開發(fā)過程中應進行風險評估，需要通過合理的生產(chǎn)環(huán)境和工藝設計以盡量減少產(chǎn)品的生物負荷，評估內(nèi)容包括良好的設計、詳細且有效的清潔、消毒規(guī)程；使用除菌過濾器；加強人員衛(wèi)生和適當著裝控制的操作規(guī)范；原料藥、中間體和加工助劑（例如氣體）的微生物質(zhì)量標準等。

1.3 中國

《化學藥品注射劑滅菌和無菌工藝研究及驗證指導原則（試行）》闡述了注射劑常用的滅菌工藝，即濕熱滅菌為主的終端滅菌工藝和無菌生產(chǎn)工藝。濕熱滅菌法是利用飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性從而殺滅微生物。該指南明確注射劑的濕熱滅菌工藝應首選過度殺滅法，即F0值>12 min的滅菌工藝；對熱不穩(wěn)定的藥物，可以選擇殘存概率法，即F0值>8 min的滅菌工藝。如經(jīng)充分的研究（包括處方工藝研究、質(zhì)量控制研究等）證實產(chǎn)品無法耐受終端滅菌工藝，則可考慮采用包含除菌過濾的無菌工藝或無菌分裝的全無菌工藝。采用無菌分裝工藝所涉及的物料均應經(jīng)過滅菌或無菌驗證，同時需要對各物料的無菌性、細菌內(nèi)毒素水平等進行嚴格控制。任何商業(yè)上的考慮均不能作為不采用具有最高無菌保證水平的終端滅菌工藝的理由?；瘜W仿制注射劑選擇的滅菌或無菌工藝，應能保證其無菌保證水平不低于參比制劑。同時說明與過度殺滅法相比，殘存概率法的熱能較低，為不降低產(chǎn)品的無菌保證水平，除了需要對滅菌過程本身進行嚴格的控制以外，還需要合理的工藝設計來降低微生物污染，并采用適當?shù)姆椒▽ξ⑸镂廴舅胶湍蜔嵝赃M行監(jiān)測。目前，我國化學藥品注射劑的滅菌或無菌工藝選擇要求與歐美國家基本一致。

GMP指南是藥品監(jiān)督管理的重要措施，也是藥品生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系提升的重要工具。中國2010年修訂的GMP指南于2011年啟動實施，第2版GMP目前由國家藥品監(jiān)督管理局食品藥品審核查驗中心負責修訂，無菌制劑分冊非常詳細地闡述了無菌制劑的生產(chǎn)、無菌、控制等。

第2版GMP《附錄：無菌藥品》明確指出產(chǎn)品的無菌或其他質(zhì)量特性絕不能只依賴于任何形式的最終處理或成品檢驗（包括無菌檢查），滅菌或無菌工藝及其驗證是保證滅菌制劑無菌性的重要環(huán)節(jié)。無菌制劑應優(yōu)先選擇最終滅菌工藝，包括濕熱滅菌和干熱滅菌。（1）常見的濕熱滅菌程序包括脈動真空滅菌程序（或稱預真空滅菌程序）、混合蒸汽-空氣滅菌程序和過熱水滅菌程序等。濕熱滅菌驗證建議通過風險評估方式確定溫度探頭的數(shù)量和位置（如蒸汽最難或最易達到的位置、空氣最難或最易移除的位置），一般至少選擇10個溫度探頭，編號后固定在水平向和垂直向有代表性的空間內(nèi)，幾何中心和角落應有代表性位點，另外在與溫度控制傳感器相連的冷凝水排放口（低溫點）放置探頭，連續(xù)重復3次測試應符合要求。同時說明必須放置探頭的位置為冷點附近、設備自帶溫度探頭附近、冷凝排水口附近。驗證過程中無論使用有線傳感器還是無線溫度探頭，探頭必須周期性校驗，熱電偶探頭用于驗證前應進行校正，熱電阻探頭應定期進行校正，各探頭校準偏差建議應小于±1.0℃。微生物挑戰(zhàn)實驗為各位置的殺滅效率提供必要的證據(jù)，通常和熱穿透測試同時進行，在過度殺滅法中，通常選擇菌種嗜熱芽孢桿菌Geobacillus stearothermophilus或其芽孢，也可采用其他對濕熱滅菌耐熱性強的微生物。在殘存概率法中典型的生物指示劑包括生孢梭菌Clostridium sporogenes、史式芽孢桿菌Bacillus smithii和枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis。另外指出當生物指示劑所處的溶液或載體對生物指示劑的耐熱性有影響時，例如葡萄糖溶液中、橡膠膠塞的表面（膠塞表面是多孔性材質(zhì)，會導致微生物耐熱性增加），應在驗證實驗中對實際條件下生物指示劑的耐熱性進行評估。

（2）干熱滅菌法則是利用高溫使微生物或脫氧核糖核酸酶等生物高分子產(chǎn)生非特異性氧化而殺滅微生物的方法。按照熱傳遞方式可以劃分為對流傳熱、傳導熱、輻射熱3種傳熱形式。干熱滅菌適用于耐高溫物品的滅菌，如玻璃、金屬設備、器具，不需濕氣穿透的油脂類，耐高溫的粉末化學藥品等，但不適用于橡膠、塑料及大部分藥品的滅菌，同時干熱也可用于除熱原。對于非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌法其待過濾料液的微生物污染需更嚴格的控制，除菌過濾前待過濾料液的微生物污染水平不高于每100毫升10 CFU。最終的除菌過濾濾器應當盡可能接近灌裝點。除菌過濾器使用后，必須采用適當?shù)姆椒⒓磳ζ渫暾赃M行檢查并記錄，常用的方法有起泡點實驗、擴散流實驗或壓力保持實驗。另外過濾膜材質(zhì)的選擇主要考慮構成過濾膜材質(zhì)的物理化學性質(zhì)是否符合實際工藝的要求，除菌過濾器不得脫落纖維，嚴禁使用含有石棉的過濾器。濾膜材質(zhì)分為親水性膜材和疏水性膜材，親水性膜材一般用于液體過濾，如親水性聚偏二氟乙烯（PVDF）、聚醚砜（PES）、尼龍、纖維素酯等；疏水性膜材一般用于氣體過濾和有機溶媒過濾。

第2版GMP指南新增脂質(zhì)體和預灌封注射器等內(nèi)容，預灌封注射器是將藥物儲存和注射功能融為一體的劑型。通常預灌封注射器采用即用型免洗免滅菌的內(nèi)包材，制藥企業(yè)需要關注包材的滅菌效果、滅菌殘留、運輸完整性驗證等質(zhì)量要點。無菌脂質(zhì)體制劑采用除菌過濾工藝居多，需要關注濾芯堵塞、顆粒截留、過濾時間延長、過濾后料液均勻性改變等風險。

二

化學藥品注射劑的無菌保障控制要點

2.1 質(zhì)量風險管理

為最大程度降低無菌藥品生產(chǎn)過程中引入污染的風險，確保化學藥品注射劑的無菌性，生產(chǎn)企業(yè)必須具有高度的質(zhì)量風險管理意識。對生產(chǎn)各環(huán)節(jié)引入污染的風險進行識別及評估，需要考慮的要素包括廠房和設施、人員、空氣和水系統(tǒng)、原輔料的控制、產(chǎn)品容器密封性、無菌或滅菌生產(chǎn)工藝及驗證、清潔和消毒、日常監(jiān)測、糾正和預防措施等。應基于對產(chǎn)品和工藝等的全面理解建立預防污染控制措施，制定質(zhì)量管理體系，并進行定期監(jiān)測與更新。

其中對于滅菌或無菌工藝應考慮的因素包括但不限于成品最終滅菌工藝的選擇、滅菌設備的選擇及裝載方式、滅菌物料應在使用前檢查包裝完整性、滅菌柜排水口的溫度記錄、除菌過濾器使用后完整性測試、灌裝和密封操作的控制和監(jiān)測、凍干機的定期滅菌及驗證、凍干機真空或檢漏測試頻率等。

2.2 滅菌或無菌工藝驗證

滅菌或無菌工藝是無菌保障的關鍵要素，化學藥品注射劑的滅菌或無菌工藝需要開展工藝驗證，以進一步確認滅菌或無菌工藝是否能夠達到預期的無菌保證水平。

采用濕熱滅菌工藝的驗證，一般分為物理確認和生物學確認兩部分，物理確認包括熱分布實驗、熱穿透實驗等，生物學確認主要是微生物挑戰(zhàn)實驗。物理確認和微生物挑戰(zhàn)實驗結果應一致，兩者不能相互替代。生產(chǎn)企業(yè)基于實際需求和風險考慮滅菌柜的裝載模式，所有裝載均需要經(jīng)過驗證。裝載熱分布實驗需要考慮最大、最小和生產(chǎn)過程中典型裝載量情況，實驗時應盡可能使用待滅菌產(chǎn)品，待滅菌產(chǎn)品的裝載方式和滅菌工藝等各項參數(shù)的設定應與正常生產(chǎn)時一致，應采用適宜的方式描述產(chǎn)品的裝載方式，并評估探頭放置是否合理。熱穿透實驗用于考察滅菌器和滅菌程序?qū)Υ郎缇a(chǎn)品的適用性，應采用足夠數(shù)量的溫度探頭，同時熱穿透溫度探頭應滿足置于藥液中最難或最遲達到滅菌溫度的點、或F0值最低的點。通常情況下，熱分布實驗的保溫階段內(nèi)溫度波動應在±1.0℃以內(nèi)，升、降溫過程的溫度波動可通過總體F0值來反映。濕熱滅菌工藝的微生物挑戰(zhàn)實驗是指將一定量已知微生物耐熱參數(shù)（DT）值的耐熱芽孢（生物指示劑）在設定的濕熱滅菌條件下進行滅菌，以驗證設定的滅菌工藝是否確實能使產(chǎn)品達到預定的無菌保證水平。使用市售生物指示劑時，應確保生物指示劑的DT值和總芽孢數(shù)等主要質(zhì)量參數(shù)的準確性。生物指示劑的接種量（即初始芽孢數(shù)）需要根據(jù)生物指示劑在待滅菌樣品中的耐受性和滅菌工藝條件來確定，應符合挑戰(zhàn)性實驗的要求，并且滅菌設備的冷點處必需放置生物指示劑。熱分布、熱穿透實驗及生物指示劑挑戰(zhàn)實驗均需要至少連續(xù)進行3次。

采用無菌生產(chǎn)工藝的驗證，主要包括除菌過濾工藝驗證及無菌工藝模擬實驗。除菌過濾工藝的產(chǎn)品應進行除菌過濾工藝驗證及無菌工藝模擬實驗，無菌分裝工藝的產(chǎn)品應進行無菌工藝模擬實驗。除菌過濾工藝驗證一般包括細菌截留實驗、化學兼容性實驗、可提取物或浸出物實驗、安全性評估和吸附評估等。除菌過濾器通常不推薦重復使用。無菌工藝模擬實驗采用培養(yǎng)基或其他介質(zhì)，模擬制劑生產(chǎn)中無菌操作的全過程，評價該工藝無菌保障水平，應結合產(chǎn)品特點及實際工藝中的最差條件進行研究。對于注射用無菌粉末其分裝所用的生產(chǎn)線與常規(guī)液體灌裝線不同，進行無菌工藝模擬實驗時需要將培養(yǎng)基及模擬介質(zhì)均灌裝入容器中，模擬方法通常包括使用無菌粉末分裝設備將液體培養(yǎng)基和模擬介質(zhì)進行一步灌裝；或加裝特殊設備灌裝液體培養(yǎng)基；或先在線灌裝無菌液體培養(yǎng)基到容器中，然后再在生產(chǎn)線上進行無菌粉末的分裝模擬；或先在生產(chǎn)線上進行無菌粉末的分裝，然后再灌裝無菌液體培養(yǎng)基到容器中；或其他方式?？諝鈨艋到y(tǒng)、生產(chǎn)用設備、無菌生產(chǎn)工藝及人員重大變更，或設備的重大維修后，應通過風險評估進行無菌工藝再驗證。

對于預灌封注射劑的無菌工藝模擬實驗還需要關注培養(yǎng)基模擬灌裝的數(shù)量，如遠小于實際生產(chǎn)批次的數(shù)量，在模擬過程中考慮到拆外包裝和拆內(nèi)包裝工序會帶來微生物污染的風險，在培養(yǎng)基模擬灌裝中需要進行風險評估和模擬設備的運行。對于使用真空加塞的預灌封注射劑，由于真空加塞可能會導致預灌封注射劑內(nèi)部不存在空氣，在無菌工藝模擬實驗中如果預灌封注射器中沒有充足的空氣，有可能導致培養(yǎng)基生長出現(xiàn)失敗。為了避免這種情況，在無菌工藝模擬實驗中應考慮降低真空度、適當減少培養(yǎng)基灌裝的體積，確保預灌封注射器內(nèi)的空氣體積能夠滿足微生物生長的需要。

另外，對于注射劑包裝容器的完整性可依據(jù)《化學藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術指南（試行）》等指導原則開展研究及驗證。

三

結語

化學藥品無菌注射劑的全生命周期中，應基于科學和風險建立全面的無菌生產(chǎn)和質(zhì)量控制策略，賦予產(chǎn)品足夠的無菌保障。筆者在審評工作中發(fā)現(xiàn)部分申請人遞交的申報資料存在對于注射劑滅菌或無菌工藝的選擇未提供研究依據(jù)、滅菌或無菌工藝驗證內(nèi)容不全面等問題。制藥企業(yè)應基于產(chǎn)品特性合理選擇并評估化學藥品注射劑的滅菌或無菌工藝，確定關鍵工藝參數(shù)及過程控制，并結合生產(chǎn)實際情況開展相應的滅菌或無菌工藝驗證。同時，應嚴格執(zhí)行GMP規(guī)范，對生產(chǎn)各環(huán)節(jié)潛在的污染風險進行評估，建立質(zhì)量管理體系及風險控制策略，確保制劑的無菌水平，以實現(xiàn)對產(chǎn)品無菌的最大保障，以提升我國制藥行業(yè)的整體水平，推進我國向制藥強國邁進，保護公眾健康。

參考文獻

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[2] FDA. Takeda Pharmaceutical Company Limited [EB/OL].(2020-06-16) [2023-07-20]. https://www. fda. gov/inspections-compliance-enforcement-and-criminal investigations/warning-letters/takeda-pharmaceutical company-limited-603596-06092020.

[3] 國家藥監(jiān)局藥審中心 . 化學藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價技術要求的通告(2020 年第 2 號)[ EB/OL]. (2020-05-14)[2023-07-20]. https://www.cde.org.cn/main/news/viewInfoCommon/8a4f9f16844fbed617f8e8ed

59485c1d. Center for Drug Evaluation, NMPA. Guidance for quality and efficacy technical

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