上期文章，鼎泰團(tuán)隊(duì)對(duì)臨床試驗(yàn)失敗的6款siRNA藥物及失敗原因進(jìn)行了復(fù)盤(pán)分析（點(diǎn)擊查看原文），同時(shí)也借鑒這些案例啟發(fā)我們?nèi)绾卧趕iRNA藥物早期研究中更好地進(jìn)行非臨床藥效學(xué)研究和概念驗(yàn)證試驗(yàn)。
siRNA藥物通過(guò)調(diào)控mRNA增加或減少疾病相關(guān)蛋白的產(chǎn)生而發(fā)揮藥理學(xué)活性。評(píng)價(jià)mRNA 和蛋白水平的變化，需建立合適的體外和體內(nèi)模型?除了已被業(yè)界所熟知的基于LNP遞送系統(tǒng)和GalNac偶聯(lián)技術(shù)以外，對(duì)于肝外靶向遞送、新型作用機(jī)制的siRNA藥物，藥效學(xué)研究或藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)(PK/PD)具有更為重要的意義。
與小分子藥物和蛋白類(lèi)藥物不同， siRNA藥物 PK/PD 關(guān)系獨(dú)特：
血漿中暴露時(shí)間短、靶器官（如肝臟）中暴露時(shí)間長(zhǎng)且藥效作用持久
圖1. Givosiran、Inclisiran 和 Vutrisiran：血漿中siRNA濃度和血清中PD標(biāo)志物變化關(guān)系[1]
關(guān)鍵的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)是胞漿中siRNA和RISC復(fù)合物，而非血漿或靶器官中總的siRNA濃度
圖2. 肝臟中siRNA總濃度、siRNA-RISC濃度和PD標(biāo)志物變化關(guān)系[1]
siRNA的內(nèi)體逃逸效率、siRNA與RISC的結(jié)合動(dòng)力學(xué)也可能因平臺(tái)或遞送系統(tǒng)而異
圖3. GalNac siRNA進(jìn)入細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)分布和發(fā)揮藥理學(xué)活性的過(guò)程和關(guān)鍵步驟[2]
圖4. 兩種方案可提高 siRNA 內(nèi)體逃逸效率[3]
上述特點(diǎn)使得siRNA藥物的藥效學(xué)評(píng)價(jià)和臨床轉(zhuǎn)化面臨較大的挑戰(zhàn)。未來(lái)需要開(kāi)展更多關(guān)于siRNA藥物作用機(jī)制和PK過(guò)程（包括細(xì)胞內(nèi)PK）的定量研究，以獲得更加精準(zhǔn)的用于提示臨床有效性和指導(dǎo)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)的非臨床藥效學(xué)數(shù)據(jù)。此外，整合已有的非臨床和臨床數(shù)據(jù)對(duì)模型進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化同樣重要。
本文對(duì)已獲得FDA批準(zhǔn)上市的6款siRNA藥物（截至2024年2月）的非臨床藥效學(xué)研究進(jìn)行了匯總（文末查看），并簡(jiǎn)要總結(jié)了設(shè)計(jì)要點(diǎn)和研究思路。
體外試驗(yàn)是siRNA藥物研發(fā)的重要環(huán)節(jié)，用于篩選靶向特異性強(qiáng)、活性高的siRNA序列。通常，選擇人或動(dòng)物的原代細(xì)胞?細(xì)胞系或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系作為試驗(yàn)體系，考察siRNA對(duì)細(xì)胞活性?功能?相關(guān)蛋白和靶mRNA 水平的影響?借助體外試驗(yàn)，除了可考察對(duì)人體靶點(diǎn)的作用外，還能評(píng)估對(duì)不同種屬mRNA的影響，為毒理學(xué)試驗(yàn)中相關(guān)種屬的選擇提供依據(jù)?根據(jù)FDA審評(píng)報(bào)告，已上市的6款siRNA藥物均可濃度依賴(lài)性地調(diào)控靶mRNA并改變蛋白表達(dá)水平，產(chǎn)生體外活性；均在猴體內(nèi)表現(xiàn)出藥理學(xué)活性?
表1. 已上市siRNA藥物相關(guān)種屬匯總
此外，借助在線工具（in silico）對(duì)不同種屬間靶mRNA的同源性進(jìn)行比對(duì)或預(yù)測(cè)其與候選siRNA藥物的配對(duì)情況，為相關(guān)種屬的選擇提供參考；對(duì)人轉(zhuǎn)錄本中可能與候選siRNA藥物發(fā)生雜交的非目標(biāo)序列（脫靶序列）進(jìn)行初步篩選，然后進(jìn)行進(jìn)一步的體外試驗(yàn)和/或更全面的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估（siRNA候選分子多層級(jí)脫靶效應(yīng)評(píng)估策略，發(fā)表中）。
siRNA藥物與靶mRNA 的配對(duì)具有很高的特異性，只有與靶mRNA同源性高的序列才能配對(duì)成功。通常，通過(guò)1中所述手段進(jìn)行相關(guān)種屬的選擇，然后在相關(guān)種屬動(dòng)物中開(kāi)展體內(nèi)藥效學(xué)研究；非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物是評(píng)價(jià)siRNA藥物體內(nèi)藥效學(xué)的重要模型，可以確定有效劑量范圍并評(píng)估給藥方案。如沒(méi)有可產(chǎn)生藥理學(xué)活性的相關(guān)種屬，可選擇轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型，或開(kāi)展相應(yīng)的體外藥效學(xué)試驗(yàn)?
通過(guò)體內(nèi)藥效學(xué)試驗(yàn)，可對(duì)劑量-效應(yīng)關(guān)系、時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系、療效相關(guān)生物標(biāo)志物等進(jìn)行探索。此外，從定量藥理的角度，PK/PD模型、劑量-效應(yīng)-時(shí)間模型、PK/PB模型等在siRNA藥物開(kāi)發(fā)中發(fā)揮著重要作用，可用于將藥物研發(fā)從臨床前到臨床各階段的數(shù)據(jù)進(jìn)行模擬、外推和預(yù)測(cè)。對(duì)于研發(fā)者充分理解和利用siRNA藥物獨(dú)特的PK/PD關(guān)系、指導(dǎo)siRNA藥物的開(kāi)發(fā)至關(guān)重要?？茖W(xué)合理地設(shè)計(jì)臨床前藥效學(xué)試驗(yàn)，結(jié)合轉(zhuǎn)化角度的研究，可以更好地支持siRNA產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)和人體療效預(yù)測(cè)，有助于確定臨床首次人體試驗(yàn)（FIH）及不同臨床階段的給藥方案，并用于NDA申請(qǐng)時(shí)作為支持臨床劑量選擇依據(jù)的描述。已上市siRNA藥物，如patisiran和givosiran的上市批準(zhǔn)均采用了上述藥效學(xué)模型。
圖5. Givosiran劑量-尿ALA/PBG水平（上）、劑量-尿ALAS1 mRNA/ALA/RBG水平（中）、劑量-尿ALA/PBG水平（下）相關(guān)性分析[4]
在嚴(yán)格遵守動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理規(guī)范和不同國(guó)家藥品監(jiān)管要求的前提下，鼎泰集團(tuán)依托豐富的非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物疾病模型資源、專(zhuān)業(yè)的小核酸藥物藥效學(xué)、DMPK 和安全性評(píng)價(jià)經(jīng)驗(yàn)，將持續(xù)高效助力國(guó)內(nèi)外siRNA 藥物的轉(zhuǎn)化研究、臨床開(kāi)發(fā)和注冊(cè)申報(bào)。
鼎泰集團(tuán)子公司昆明科靈（KBI）在非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物疾病模型藥效學(xué)研究方面積累了豐富經(jīng)驗(yàn)。依靠資源和技術(shù)優(yōu)勢(shì)，我們已經(jīng)建立了多種自發(fā)性或誘導(dǎo)性非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物疾病模型（恒河猴、食蟹猴，詳見(jiàn)圖6），這些模型具有與人同源性高、疾病的基因型和表型與疾病人群更為接近的優(yōu)點(diǎn)。
圖6. 鼎泰集團(tuán)已經(jīng)建立多種適用于siRNA藥物藥效學(xué)研究的非人靈長(zhǎng)類(lèi)疾病動(dòng)物模型
在siRNA領(lǐng)域，KBI常年與多家國(guó)內(nèi)外領(lǐng)先核酸藥物公司保持緊密合作。截至目前， KBI已完成了 30 多項(xiàng)siRNA藥物的概念驗(yàn)證試驗(yàn)和臨床前藥效學(xué)研究，其中涵蓋諸如高血脂、NASH、高血壓等多個(gè)熱門(mén)適應(yīng)癥。同時(shí)， KBI緊密跟進(jìn)行業(yè)研發(fā)趨勢(shì)和臨床需求，借助鼎泰集團(tuán)戰(zhàn)略性?xún)?yōu)勢(shì)，持續(xù)加強(qiáng)在新技術(shù)領(lǐng)域的前瞻性布局和技術(shù)能力建設(shè)，致力于滿足不同客戶在創(chuàng)新siRNA藥物（包括新的適應(yīng)癥、遞送系統(tǒng)、聯(lián)合用藥）研發(fā)需求的新模型的探索。
[1] Guohua An. Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of GalNAc-Conjugated siRNAs. The Journal of Clinical Pharmacology. 2024, 64(1) 45–57
[2] Jae Yoon Jeon, Vivaswath S. Ayyar. Amitava Mitra. Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Modeling of siRNA Therapeutics – a Minireview. Pharmaceutical Research (2022) 39:1749–1759
[3] Steven F. Dowdy. Endosomal escape of RNA therapeutics: How do we solve this rate-limiting problem? RNA. 2023 Apr; 29(4): 396–401.
[4] MULTI-DISCIPLINE REVIEW of Givosiran.
https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/nda/2019/212194Orig1s000MultidisciplineR.pdf
供稿：鼎泰集團(tuán)轉(zhuǎn)化科學(xué)和藥政策略部
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