抗體偶聯(lián)藥物 (ADC) 將抗體的特異性和長體內(nèi)循環(huán)時間，與化學(xué)細(xì)胞抑制劑或其他活性藥物的毒性結(jié)合起來，使用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)接頭來降低全身毒性并增加治療指數(shù)。這種大分子和小分子的組合增加了復(fù)雜性。需要多個生產(chǎn)過程來生產(chǎn)天然抗體，藥物和接頭，然后偶聯(lián)形成最終的抗體-藥物偶聯(lián)物。
上述各組分偶聯(lián)的過程增加了控制點的數(shù)量，使得在產(chǎn)品開發(fā)生命周期中需要額外的規(guī)范和強化的分析表征。分享一篇諾華等多家藥企聯(lián)合發(fā)表的文章，闡述從CMC監(jiān)管角度對ADC藥物的考量。
圖 1. 典型抗體偶聯(lián)藥物的結(jié)構(gòu)
關(guān)于ADC工藝變更的考慮
與其他生物分子一樣，ADC的制造工藝在開發(fā)或上市后也會發(fā)生變化，因為人們期望提高穩(wěn)健性或簡化工藝，更改或增加制造商，擴大規(guī)模，提高產(chǎn)品質(zhì)量或穩(wěn)定性，或適應(yīng)不斷變化的監(jiān)管期望。ADC整體制造工藝的復(fù)雜性在確定如何充分應(yīng)對變更的影響時帶來了額外的挑戰(zhàn)。ADC開發(fā)商有責(zé)任評估工藝變更是否會對ADC產(chǎn)品的安全性和有效性產(chǎn)生負(fù)面影響。本節(jié)詳細(xì)介紹了中間體，DS (原料藥) 和DP (制劑) 工藝變更的注意事項。
風(fēng)險分析：藥物，連接子和藥物連接子中間體是小分子，這意味著它們的特征非常明顯，通常有全面的分析方法來證明結(jié)構(gòu)，純度和雜質(zhì)概況的一致性。藥物連接子生產(chǎn)和放行過程中的檢查點通常為控制影響ADC的雜質(zhì)提供了最佳機會。在典型的ADC偶聯(lián)工藝中，偶聯(lián)反應(yīng)后會進(jìn)行UF/DF以去除源自藥物連接子中間體的試劑，溶劑和其他低分子量雜質(zhì)。在某些ADC工藝中還會使用色譜步驟去除小分子雜質(zhì)。因此在藥物連接子生產(chǎn)工藝中，通常可以充分控制由藥物連接子生產(chǎn)工藝的變化導(dǎo)致的未偶聯(lián)雜質(zhì)對最終ADC DS和DP產(chǎn)生的風(fēng)險。工藝變更后的可比性評估決策樹 (圖9A)：如果對藥物連接子中間體的分析評估表明，在工藝變化之前和之后，藥物連接子中間體具有相同的結(jié)構(gòu)、可比的純度分布和反應(yīng)活性，則該評估通常不需要對衍生的ADC DS或DP進(jìn)行可比性研究。如果發(fā)現(xiàn)純度/雜質(zhì)概況存在顯著差異，建議進(jìn)行風(fēng)險評估，以評估這種差異對最終ADC藥物產(chǎn)品的安全性和有效性的影響，并應(yīng)注意與藥物連接子的預(yù)期用途保持一致，而不是基于對ADC DS或DP的期望。關(guān)于是否要求對新雜質(zhì)進(jìn)行鑒定的決定應(yīng)側(cè)重于DS和DP中雜質(zhì)水平帶來的風(fēng)險，可參照上文：文獻(xiàn)分享：從CMC監(jiān)管角度對ADC藥物的考量 Part I。
圖 9A. 藥物，連接子或藥物連接子中間體工藝變化的可比性評估決策樹
mAb中間體是一種大分子，其質(zhì)量屬性的完整分析本身就更加復(fù)雜。隨著先進(jìn)分析工具的發(fā)展，表征mAb中間體結(jié)構(gòu)和監(jiān)測關(guān)鍵質(zhì)量屬性 (CQA) 的能力已經(jīng)變得更加成熟。然而仍然存在一些風(fēng)險，如所使用的分析工具可能不夠靈敏，無法檢測到可能影響最終ADC產(chǎn)品安全性和有效性的所有質(zhì)量屬性。- 評估重點：應(yīng)評估m(xù)Ab中間體的細(xì)胞系，細(xì)胞培養(yǎng)，純化或分離過程中的工藝變化。與任何mAb藥物一樣，mAb中間體在mAb水平上控制的質(zhì)量屬性也應(yīng)在ADC中保持控制，如糖基化，外來病毒和宿主細(xì)胞蛋白等。另外，確定mAb中間體是否適合反應(yīng)和偶聯(lián)過程的質(zhì)量屬性 (如靶標(biāo)結(jié)合和參與偶聯(lián)的正確氨基酸) 應(yīng)在mAb生產(chǎn)過程中進(jìn)行測試，并且可能需要進(jìn)行可比性測試。
- 工藝變更后的可比性評估決策樹 (圖9B)：如果在mAb中間體階段進(jìn)行的可比性研究成功證明了工藝變更后純度、雜質(zhì)和穩(wěn)定性方面的可比性，則無需在DS和DP階段采取進(jìn)一步行動，因為質(zhì)量已得到充分保證，無需在DS或DP中再次證明。如果無法確定mAb中間體的可比性，但已成功證明DS和/或DP的可比性，則建議對mAb中間體的差異進(jìn)行風(fēng)險評估。另外，不會對后續(xù)偶聯(lián)過程或ADC DS的CQA產(chǎn)生不利影響的非關(guān)鍵質(zhì)量屬性的差異并不妨礙對mAb中間體進(jìn)行工藝變更。
案例分析：mAb中間體中工程化半胱氨酸位點的半胱氨酸化和谷胱甘肽化通常不是CQA，先驗知識表明在偶聯(lián)過程之前的還原步驟中半胱氨酸化和谷胱甘肽化會被完全去除，并且不會影響偶聯(lián)過程和最終DS的質(zhì)量，因此半胱氨酸化和谷胱甘肽化作為翻譯后修飾的比例差異并不妨礙對mAb中間體工藝進(jìn)行變更。相反的例子是，翻譯后修飾的進(jìn)一步差異如mAb中間體中賴氨酸的糖基化，也可能影響賴氨酸偶聯(lián)ADC的藥物定位特征，這反過來可能對ADC的體外和體內(nèi)穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，因此用于賴氨酸偶聯(lián)ADC的mAb中間體中賴氨酸修飾的顯著差異值得在ADC-DS和ADC-DP水平上進(jìn)行可比性研究。
圖 9B. mAb 中間體的工藝變化的可比性評估決策樹
偶聯(lián)工藝的目的是從中間體生產(chǎn)ADC，去除雜質(zhì)并制備DS。先進(jìn)的分析工具被用于檢測組合分子的質(zhì)量特性 (如DAR值)。- 工藝變更后的可比性評估決策樹 (圖9C)：ADC制造工藝 (偶聯(lián)工藝和DS處方) 的變更應(yīng)與其他大分子產(chǎn)品的變更處理類似。一般建議僅在ADC DS級別基于風(fēng)險評估進(jìn)行可比性研究，以證明工藝變更前后ADC DS的純度、雜質(zhì)、效力、穩(wěn)定性和安全性具有可比性?？赡茏C明可比性實驗評估合理的變更包括處方變更、偶聯(lián)反應(yīng)緩沖基質(zhì)的變更、制造地點或規(guī)模的變更。但是，如果工藝變更導(dǎo)致DS不可比，或者變更可能影響DP的制造或質(zhì)量，則應(yīng)考慮在DP進(jìn)行額外的可比性評估。
案例分析：例如，如果DS的處方 (pH, 糖, 濃度) 發(fā)生變化，則可能需要在DS和DP層面進(jìn)行可比性研究。例如，如果DS是冷凍液體，而DP是凍干小瓶，那么DS的穩(wěn)定性就不能直接從ADC DP的穩(wěn)定性研究中得出。
圖 9C. ADC DS的偶聯(lián)和DS處方工藝變化的可比性評估決策樹
與其他大分子藥品類似，對于ADC DP的任何工藝變更，在DP階段都可能需要進(jìn)行風(fēng)險評估、可比性研究或前瞻性穩(wěn)定性研究，以評估對藥品純度、功效和穩(wěn)定性的影響。例如，對液體DP的填充量進(jìn)行微調(diào)或?qū)ζ咳繉硬牧线M(jìn)行微調(diào)。
5. 用于可比性研究的潛在質(zhì)量屬性的選擇表2總結(jié)了為mAb中間體、藥物連接子中間體、DS和DP的可比性研究選擇的潛在質(zhì)量屬性。此外，可以根據(jù)特定修改的風(fēng)險狀況、從以前的工藝表征中獲得的工藝知識、以及特定特征 (如偶聯(lián)技術(shù)) 來證明質(zhì)量屬性的選擇是合理的。- 對于mAb中間體，建議在工藝變更后比較純度、結(jié)合特異性、一級和高級結(jié)構(gòu)。針對效力的可比性研究類型將取決于ADC的作用方式。如果沒有證據(jù)表明ADCC或CDC活性與ADC的功效相關(guān)，則研究這些就沒有價值，可以省略。
- 對于藥物連接子中間體，其可比性研究側(cè)重于純度和雜質(zhì)概況以及種類的比較。對于在mAb中間體或藥物連接子中間體中發(fā)現(xiàn)的雜質(zhì)或修飾，建議考慮它們對后續(xù)偶聯(lián)過程的影響 (區(qū)分可偶聯(lián)和不可偶聯(lián)的雜質(zhì)) 以及對DS和DP質(zhì)量屬性影響的可能性。
對于DS和DP，為DS可比性研究選擇的質(zhì)量屬性包括藥物與抗體的比率 (DAR)、純度、效力以及一級和高級結(jié)構(gòu)。如果工藝特性和產(chǎn)品知識已經(jīng)可用，則可以使用這些信息來證明可比性研究的設(shè)計。例如，如果證明DS的DAR在工藝變更前后具有可比性，并且DAR分布在穩(wěn)定期間不會發(fā)生變化，則有理由不在DP級別測試穩(wěn)定性。
表 2. 為mAb中間體，藥物連接子中間體，DS和DP的可比性研究選擇的推薦質(zhì)量屬性
6. 穩(wěn)定性 (并行加速/應(yīng)力研究)關(guān)于穩(wěn)定性方面，適用于其他生物制劑的基本原則同樣適用：- 在GLP毒理學(xué)和GMP臨床材料之間進(jìn)行的可比性研究中，通常不需要并行比較穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。
- 如果在臨床研究期間或商業(yè)批準(zhǔn)后發(fā)生工藝變化，可比性研究應(yīng)包括并行比較穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，即穩(wěn)定性方案需要預(yù)見穩(wěn)定性結(jié)果的比較。
對于mAb中間體、DS和DP可比性，有限時間的強制降解研究和并行比較可能比實時和應(yīng)力研究方案更具參考價值。如果化學(xué)或生化特性的差異明顯，分析可比性研究不足以在工藝變更和/或加速的開發(fā)后建立可比性，則采用來自非臨床或臨床研究的額外證據(jù)是合適的 (類似于其他生物制劑)。非臨床和臨床研究的范圍和性質(zhì)將根據(jù)各個申辦方的判斷逐案確定。這些研究的目的是能夠比較工藝變更前后的材料。例如，如果有足夠的證據(jù)，影響保留時間或結(jié)合親和力的變化可以證明在嚙齒動物中進(jìn)行PK研究是合理的 (而不是在人類中進(jìn)行)。在適當(dāng)?shù)那闆r下，這些研究應(yīng)該是直接的比較研究。
在早期開發(fā)階段進(jìn)行的可比性研究不需要可比性方案，例如GLP毒理學(xué)批次和GMP臨床批次之間的比較。在早期開發(fā)中，由于對特定項目的知識和經(jīng)驗有限，無法為可比性方案設(shè)定適當(dāng)?shù)目山邮軜?biāo)準(zhǔn)。但是，對于在臨床開發(fā)后期或商業(yè)批準(zhǔn)后進(jìn)行的可比性研究，足夠的生產(chǎn)經(jīng)驗和臨床數(shù)據(jù)可以支持設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)，強烈建議采用正式的分析可比性方案。- 早期階段 (GLP毒理與GMP臨床批次)：在早期開發(fā)期間進(jìn)行的可比性研究通常側(cè)重于評估與安全性相關(guān)的質(zhì)量屬性，例如雜質(zhì)概況、藥物載量 (DAR) 和效力。一個來自GLP毒理學(xué)工藝的批次和一個來自GMP臨床工藝的批次足以評估藥物開發(fā)這一階段的可比性。通常，GMP臨床材料應(yīng)具有與GLP毒理學(xué)材料相當(dāng)或改進(jìn)的質(zhì)量屬性 (例如純度提高)。毒理學(xué)批次和臨床批次之間應(yīng)保持可比的DAR值。ADC的效力應(yīng)包括在評估中，并應(yīng)證明毒理學(xué)和臨床產(chǎn)品之間的細(xì)胞毒性相當(dāng)。除非GMP生產(chǎn)工藝與GLP毒理學(xué)有顯著差異，否則通常不需要比較穩(wěn)定性數(shù)據(jù) (加速和/或壓力穩(wěn)定性) 來證明可比性。
后期階段 (臨床工藝與關(guān)鍵工藝)：后期開發(fā)期間進(jìn)行的可比性研究應(yīng)包括與安全性、功效、質(zhì)量和穩(wěn)定性相關(guān)的質(zhì)量屬性評估。應(yīng)比較純度/雜質(zhì)概況、藥物載量 (DAR)、效力、初級和高級結(jié)構(gòu)。建議包括現(xiàn)有和新工藝的合適批次，并應(yīng)涵蓋工藝變化。應(yīng)證明DAR和效力可比。與初始工藝相比，雜質(zhì)分布可比或改善是可以接受的。應(yīng)生成穩(wěn)定性數(shù)據(jù) (加速和/或應(yīng)力穩(wěn)定性) 以支持可比性的確定。
通用技術(shù)文件 (CTD) 的結(jié)構(gòu)
ICH通用技術(shù)文件質(zhì)量部分M4Q提供了有關(guān)在注冊申請中DS和DP的注冊檔案中呈現(xiàn)CMC信息的統(tǒng)一結(jié)構(gòu)和格式的指導(dǎo)。檔案結(jié)構(gòu)不應(yīng)受到限制，只要化學(xué)、制造和控制信息在檔案中的位置合適且易于找到即可。然而實際上，為了確定格式是否適用于特定類型的產(chǎn)品 (例如ADC)，根據(jù)作者的經(jīng)驗，建議申請人在提交檔案之前咨詢相應(yīng)的監(jiān)管機構(gòu)，以便滿足審閱者/評估員的期望。申請人可以根據(jù)遇到的具體情況靈活地選擇最合適的格式。下面簡要介紹了兩種最常見的ADC注冊申請檔案格式 (圖10)，它們并不嚴(yán)格遵循eCTD格式 (但據(jù)報道已被接受)。根據(jù)產(chǎn)品和情況，也可以考慮兩種檔案格式之間的混合。- 選項A：一個DS文件夾檔案：藥物、連接子、藥物連接子和裸mAb是ADC藥物物質(zhì)中間體，其CMC信息嵌套在DS模塊3.2.S.2.4, 3.2.S.4和其他相關(guān)部分中。S.2.4部分可根據(jù)需要為每個DS中間體劃分子部分。
- 選項B：有單獨的多個3.2.S文件夾 (例如ADC DS，藥物連接子中間體，mAb中間體各一個，如果適用，可能還有藥物中間體和連接子中間體)。每個文件夾都有一組文檔即3.2.S.1至3.2.S.7。根據(jù)ICH M4Q指南，當(dāng)一種藥品中使用多種藥物成分時，信息應(yīng)單獨呈現(xiàn)為一個完整的藥物成分，隨后是同一許可證下的其他完整藥物成分部分。
- 優(yōu)缺點和推薦：一個DS文件夾 (選項A) 和多個DS文件夾 (選項B) 檔案都有各自的優(yōu)勢。作者建議采用選項B的方法，因為它有助于行業(yè)準(zhǔn)備檔案和衛(wèi)生當(dāng)局審查。它還可以高效管理后續(xù)生命周期活動，組織簡單，并提供有關(guān)ADC DS，藥物連接子中間體和mAb中間體的CMC信息。
作者想強調(diào)的是，無論采用哪種選項都不會將中間體 (旨在實現(xiàn)偶聯(lián)和準(zhǔn)備適當(dāng)最終產(chǎn)品的規(guī)范)和DS (旨在描述安全有效的活性成分的規(guī)范) 的期望和要求視為可比的。正如本文前面所述，減少不必要或多余的工作以促進(jìn)ADC的開發(fā)應(yīng)該是最重要的目標(biāo)。如果多個ADC產(chǎn)品使用相同的藥物連接子或mAb，則可以重復(fù)使用每個單獨的藥物連接子或mAb文件夾，或在產(chǎn)品之間進(jìn)行交叉引用?？缍鄠€ADC產(chǎn)品使用ADC組件提供了一個利用平臺先前知識的明確機會，這些知識應(yīng)在檔案中適當(dāng)呈現(xiàn)，或者可以使用藥物主文件 (DMF) 來支持使用單個檔案的多個產(chǎn)品 (適用于所有選項)。
圖 10. ADC通用技術(shù)文件可能的結(jié)構(gòu)
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