2025-01-09 10:11:53來(lái)源：中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志瀏覽量：613
摘要
基于藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理六大系統(tǒng)各自領(lǐng)域的要求，以及對(duì)已上市嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T)治療產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝的分析，文章從CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)工藝質(zhì)量管控、工藝驗(yàn)證與無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)、生產(chǎn)過(guò)程的污染與交叉污染控制、生產(chǎn)相關(guān)偏差及變更控制4個(gè)主要方面，分析與探討了該類(lèi)產(chǎn)品生產(chǎn)系統(tǒng)的特殊性及相應(yīng)的質(zhì)量管理要點(diǎn)，以期為先進(jìn)治療產(chǎn)品的持有人，特別是嵌合抗原受體T細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)企業(yè)，進(jìn)一步做好生產(chǎn)系統(tǒng)質(zhì)量管理提供參考與借鑒，同時(shí)也為生產(chǎn)檢查與質(zhì)量審計(jì)提供思路。
關(guān)鍵詞
嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T)；細(xì)胞治療；藥品生產(chǎn)；質(zhì)量管理；生物制品
正文
嵌合抗原受體T細(xì)胞 (chimeric antigen receptor T cell，CAR-T) 產(chǎn)品是指通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建的修飾系統(tǒng) (如病毒載體、轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)及體外轉(zhuǎn)錄mRNA等非病毒載體)，在體外將嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR) 目的基因及調(diào)控元件轉(zhuǎn)入 T細(xì)胞，所得的可特異性識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞的T細(xì)胞產(chǎn)品。CAR-T產(chǎn)品是目前細(xì)胞治療領(lǐng)域產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程最快的細(xì)胞治療產(chǎn)品。截至 2024年9月，在全球獲批上市的數(shù)十個(gè)細(xì)胞治療產(chǎn)品中，CAR-T治療產(chǎn)品共有12個(gè)[包括我國(guó)批準(zhǔn)的6個(gè)和歐美批準(zhǔn)的6個(gè)，其中5個(gè)產(chǎn)品的靶點(diǎn)為B細(xì)胞成熟抗原 (B cell maturation antigen，BCMA)，7個(gè)產(chǎn)品的靶點(diǎn)為CD19]，在獲批細(xì)胞治療產(chǎn)品中占比高、增速快。
CAR-T產(chǎn)品通過(guò)CAR特異性識(shí)別腫瘤抗原后即發(fā)生活化，通過(guò)釋放穿孔素、顆粒酶B等實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷作用，同時(shí)還可形成免疫記憶T細(xì)胞進(jìn)而獲得抗腫瘤長(zhǎng)效機(jī)制[1]。CAR是一種人工改造的受體分子，其蛋白結(jié)構(gòu)主要包括胞外域(涉及信號(hào)肽分子、抗體scFv及鉸鏈區(qū))、跨膜域(CD8α、CD28、CD4等)和胞內(nèi)域(共刺激分子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子)3個(gè)部分；其編碼基因序列在設(shè)計(jì)好后常通過(guò)體外合成，然后亞克隆至病毒載體穿梭質(zhì)粒上。CAR-T產(chǎn)品作為自體來(lái)源的細(xì)胞治療產(chǎn)品，供者材料源于人體，可能含有傳染病病原，因而具有不同于傳統(tǒng)生物制品的特殊性[2]。在生產(chǎn)系統(tǒng)中，該特殊性的影響尤顯突出。生產(chǎn)系統(tǒng)是藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理的六大系統(tǒng)之一，是將多種物料通過(guò)適宜的設(shè)施、設(shè)備，按照批準(zhǔn)的系列生產(chǎn)工序生產(chǎn)出預(yù)期藥品的核心系統(tǒng)[3]。目前已上市CAR-T產(chǎn)品的生產(chǎn)主要包括3個(gè)環(huán)節(jié)，即質(zhì)粒生產(chǎn)、病毒載體生產(chǎn)、細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)。它的生產(chǎn)系統(tǒng)與傳統(tǒng)生物制品相比，特殊性主要集中在生產(chǎn)工藝質(zhì)量管控(包括起始物料管理、關(guān)鍵生產(chǎn)工序工藝參數(shù)和關(guān)鍵中間產(chǎn)品質(zhì)量屬性控制)、工藝驗(yàn)證與無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)、生產(chǎn)過(guò)程的污染與交叉污染防控、生產(chǎn)相關(guān)偏差調(diào)查及變更控制等4個(gè)方面。
本研究根據(jù)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理的基本原則與要求，以藥品生產(chǎn)系統(tǒng)檢查要素為基礎(chǔ)，在充分考慮目前CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)特殊性的基礎(chǔ)上，對(duì)其生產(chǎn)系統(tǒng)質(zhì)量管理要點(diǎn)進(jìn)行分析，探討監(jiān)督、檢查以及持有人落實(shí)生產(chǎn)質(zhì)量主體責(zé)任的關(guān)注點(diǎn)，以期為行業(yè)提供參考，持續(xù)提高CAR-T產(chǎn)品的生產(chǎn)質(zhì)量管理水平。
CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)工藝
質(zhì)量管控要點(diǎn)的分析
目前，在CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)的3個(gè)主要環(huán)節(jié)中，各國(guó)藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)之間尚未統(tǒng)一對(duì)質(zhì)粒和病毒載體的生產(chǎn)質(zhì)量管理考量。部分監(jiān)管機(jī)構(gòu)(如美國(guó)FDA)將其視為產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的重要組成部分，而另一部分監(jiān)管機(jī)構(gòu)(如EMA)將其視為關(guān)鍵起始物料。PIC/SGMP將質(zhì)粒和病毒載體的生產(chǎn)描述為“在GMP原則下生產(chǎn)病毒載體和質(zhì)粒”，即病毒載體和質(zhì)粒的生產(chǎn)商應(yīng)建立質(zhì)量管理體系，按照質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理，基于當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)規(guī)定，充分考慮成品安全性、有效性和質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)，以確保此類(lèi)關(guān)鍵起始物料(質(zhì)粒、病毒載體等)的質(zhì)量為核心，應(yīng)用GMP標(biāo)準(zhǔn)中最相關(guān)的部分。同時(shí)PIC/SGMP特別強(qiáng)調(diào)了質(zhì)粒和載體的生產(chǎn)在“GMP適用”或“GMP原則適用”方面需要遵循國(guó)家立法的要求[4]。但無(wú)論是作為生產(chǎn)工藝的一部分，還是作為關(guān)鍵起始物料，亦或是按照“GMP適用”或“GMP原則適用”的不同要求，對(duì)其質(zhì)量的根本要求與質(zhì)量管理在基本原則上都是一致的，即最大限度地降低污染/交叉污染、混淆以及差錯(cuò)等風(fēng)險(xiǎn)，確保持續(xù)、穩(wěn)定地生產(chǎn)出符合預(yù)定用途的產(chǎn)品。對(duì)于生產(chǎn)系統(tǒng)來(lái)說(shuō)，生產(chǎn)工藝質(zhì)量是重要的控制內(nèi)容之一，其核心在于對(duì)關(guān)鍵工藝參數(shù)(criticalprocessparameter，CPP)和關(guān)鍵質(zhì)量屬性(criticalqualityattribute，CQA)的有效管控。當(dāng)前，CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中的常見(jiàn)生產(chǎn)工序、對(duì)應(yīng)工藝參數(shù)和質(zhì)量屬性如下。
質(zhì)粒生產(chǎn)
當(dāng)前的質(zhì)粒生產(chǎn)工藝中，一般選擇大腸埃希菌作為宿主細(xì)胞(通過(guò)42℃熱激，將目的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞中制備宿主菌株，經(jīng)過(guò)單克隆篩選和測(cè)序，獲得原始種子)，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后裂解細(xì)胞，再經(jīng)下游純化后獲得，其生產(chǎn)工序、工藝參數(shù)與質(zhì)量屬性參考如表1所示。
病毒載體生產(chǎn)
目前，獲批上市的CAR-T產(chǎn)品均為病毒載體(如慢病毒、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒等載體)轉(zhuǎn)導(dǎo)。此類(lèi)病毒載體生產(chǎn)常用的細(xì)胞系如［人胚胎腎細(xì)胞(HEK293細(xì)胞)］通常具有轉(zhuǎn)染率高和易培養(yǎng)等特點(diǎn)。通過(guò)細(xì)胞復(fù)蘇、擴(kuò)增后進(jìn)行轉(zhuǎn)染，并經(jīng)收獲、純化、除菌過(guò)濾及分裝后于–80℃冷凍保存。該生產(chǎn)工藝中為了避免復(fù)制型病毒的產(chǎn)生，通常將病毒包裝所用的基因分到多個(gè)質(zhì)粒上[一般為三質(zhì)粒或四質(zhì)粒(如3個(gè)包裝質(zhì)粒和1個(gè)轉(zhuǎn)移質(zhì)粒)]，采用磷酸鈣共沉淀法等方式進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，生產(chǎn)工序、工藝參數(shù)與質(zhì)量屬性參考如表2所示。
細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)
當(dāng)前，主流CAR-T產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝主要采用病毒載體(慢病毒或γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體)轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞，包括血液樣本的采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞分選(進(jìn)一步選擇和富集T淋巴細(xì)胞群)、細(xì)胞激活(使得T細(xì)胞增殖并變得可以更高效地進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo))、細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)(通過(guò)基因修飾，將CAR基因轉(zhuǎn)入T細(xì)胞中，通過(guò)細(xì)胞自身的轉(zhuǎn)錄與翻譯，在T細(xì)胞膜上表達(dá)CAR蛋白)、細(xì)胞擴(kuò)增(獲得預(yù)期產(chǎn)品與產(chǎn)量，注意擴(kuò)增前應(yīng)清除病毒)、細(xì)胞收獲、細(xì)胞收集(去除/減少雜質(zhì)、增加總體細(xì)胞濃度、進(jìn)行基礎(chǔ)制劑溶液交換)、輔料添加(將細(xì)胞與緩沖液、蛋白質(zhì)、輔助物質(zhì)和冷凍保護(hù)劑組合在一起，常見(jiàn)的如：5％～10%DMSO、人血白蛋白、葡聚糖、氯化鈉等)、灌裝、貼簽、凍存、運(yùn)輸至回輸?shù)裙ば?，其生產(chǎn)工序、工藝參數(shù)與質(zhì)量屬性參考如表3所示。
表1至表3中的內(nèi)容僅為初步參考，其中許多工藝參數(shù)與質(zhì)量屬性參考項(xiàng)并非嚴(yán)格意義上的CPP與CQA，列入表中的主要目的是引起適度關(guān)注，避免在產(chǎn)品研發(fā)、工藝設(shè)計(jì)及工藝驗(yàn)證中出現(xiàn)忽略或遺漏，也為藥品現(xiàn)場(chǎng)檢查工作提供參考。在實(shí)際研發(fā)及生產(chǎn)中，企業(yè)應(yīng)根據(jù)具體研究數(shù)據(jù)，基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理確定生產(chǎn)工藝與工序，明確產(chǎn)品各工序?qū)?yīng)的CPP與CQA，規(guī)定細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中各生產(chǎn)設(shè)備和程序的選擇，以及參數(shù)設(shè)置和范圍。其中，自體細(xì)胞治療不可避免地存在患者間個(gè)體差異，應(yīng)特別注意參數(shù)范圍制定的合理性。對(duì)于同種異體的CAR-T產(chǎn)品，其生產(chǎn)工序與自體CAR-T產(chǎn)品相似，但為了降低免疫原性帶來(lái)的潛在安全性風(fēng)險(xiǎn)(如急性排斥反應(yīng))，通常會(huì)進(jìn)行額外的基因修飾(如在細(xì)胞激活后增加基因敲除步驟使細(xì)胞免疫相容)。如果質(zhì)粒、病毒載體被視為關(guān)鍵起始物料管理，需要特別關(guān)注質(zhì)粒與病毒載體來(lái)源、工藝驗(yàn)證、放行標(biāo)準(zhǔn)與進(jìn)廠檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)、供應(yīng)商生產(chǎn)質(zhì)量管理能力、供應(yīng)商審計(jì)與供應(yīng)商管理等內(nèi)容，確保用于生產(chǎn)的質(zhì)粒與病毒載體能持續(xù)、穩(wěn)定地符合預(yù)定用途，其生產(chǎn)質(zhì)量管理應(yīng)能最大限度地降低污染/交叉污染以及混淆、差錯(cuò)的風(fēng)險(xiǎn)。
CAR-T產(chǎn)品的工藝驗(yàn)證
與無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)
當(dāng)前，CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)線主要包括生產(chǎn)單元式(也稱(chēng)為一站式布局，即由多個(gè)覆蓋完整生產(chǎn)工序的生產(chǎn)單元組成，每個(gè)生產(chǎn)單元內(nèi)可完成所有生產(chǎn)工序)和集中功能間式(也稱(chēng)為結(jié)合型布局，即由多個(gè)針對(duì)不同生產(chǎn)工序的生產(chǎn)操作間組成，每個(gè)生產(chǎn)操作間可以完成產(chǎn)品生產(chǎn)中的部分生產(chǎn)工序)2類(lèi)設(shè)計(jì)與建造方式，或在此2類(lèi)方式基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)合或調(diào)整的布局設(shè)計(jì)(如大廳式)。CAR-T產(chǎn)品的工藝驗(yàn)證與無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)需要以符合GMP相應(yīng)規(guī)定為基礎(chǔ)，結(jié)合對(duì)工藝和產(chǎn)品特性的理解，充分考慮最差條件帶來(lái)的污染/交叉污染潛在挑戰(zhàn)，依據(jù)其生產(chǎn)工藝與生產(chǎn)線的特點(diǎn)采取適宜的策略。
產(chǎn)品工藝驗(yàn)證
從驗(yàn)證的生命周期角度分析，CAR-T產(chǎn)品的工藝驗(yàn)證同樣包括工藝設(shè)計(jì)、工藝驗(yàn)證和持續(xù)工藝確認(rèn)與再驗(yàn)證等階段。企業(yè)需要在對(duì)生產(chǎn)工藝充分理解的基礎(chǔ)上，通過(guò)工藝設(shè)計(jì)識(shí)別出適宜的CPP和CQA及其范圍，通過(guò)至少連續(xù)3批成功的工藝驗(yàn)證來(lái)證實(shí)工藝設(shè)計(jì)階段的結(jié)論，證明該商業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程符合預(yù)期，并明確后期持續(xù)監(jiān)測(cè)的重點(diǎn)，后期再采用持續(xù)工藝確認(rèn)證明生產(chǎn)工藝始終處于穩(wěn)定的控制狀態(tài)；當(dāng)出現(xiàn)重大變更等情況時(shí)，進(jìn)行必要的工藝再驗(yàn)證[12]。在CAR-T產(chǎn)品的生產(chǎn)中，工藝驗(yàn)證需要特殊考慮的內(nèi)容主要包括以下5點(diǎn)。
當(dāng)同一生產(chǎn)區(qū)域存在多條相同生產(chǎn)線(生產(chǎn)單元)或相同生產(chǎn)設(shè)備時(shí)，由于生產(chǎn)操作與處理流程基本是相似的，工藝驗(yàn)證可以結(jié)合產(chǎn)能驗(yàn)證[13](如最多可同時(shí)進(jìn)行生產(chǎn)操作的生產(chǎn)線或生產(chǎn)設(shè)備數(shù)量)的要求，基于實(shí)際情況進(jìn)行充分的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，進(jìn)而科學(xué)、合理地進(jìn)行設(shè)計(jì)，如對(duì)于同一房間內(nèi)存在同型號(hào)生產(chǎn)設(shè)備的情況，可考慮采用“3+1+1+…”(注意對(duì)全部生產(chǎn)單元/生產(chǎn)設(shè)備的覆蓋)的方式，但注意須在基于等同性評(píng)估、已掌握知識(shí)、積累的平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)、設(shè)施和設(shè)備設(shè)計(jì)、已完成的設(shè)備確認(rèn)等方面對(duì)實(shí)際情況進(jìn)行充分評(píng)估的前提下[14]。
受到起始物料細(xì)胞的影響，工藝驗(yàn)證可以用替代的起始物料(如來(lái)源于健康志愿者的細(xì)胞)進(jìn)行驗(yàn)證，但應(yīng)注意評(píng)估替代起始物料的代表性，并考慮在生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵方面使用實(shí)際起始物料進(jìn)行補(bǔ)充驗(yàn)證；受限于起始物料的有限性(源自患者的自體細(xì)胞)，可采用同步驗(yàn)證的方式。
對(duì)于直接用于細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)的基因修飾載體(如病毒載體)或其他賦予其特定功能的材料(包括質(zhì)粒)，其生產(chǎn)工藝應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。
采用自體細(xì)胞治療時(shí)，患者間個(gè)體差異的現(xiàn)象客觀存在；工藝驗(yàn)證中對(duì)CPP的識(shí)別與參數(shù)范圍的制定應(yīng)特別注意其合理性，且考慮到細(xì)胞治療技術(shù)的快速更新與不斷累積，工藝控制策略應(yīng)在保證安全性和有效性的前提下，保留一定的靈活性。
持續(xù)工藝確認(rèn)中，需要基于CAR-T產(chǎn)品(包括病毒載體和質(zhì)粒)生產(chǎn)的特點(diǎn)選擇適宜的CPP與CQA，進(jìn)行及時(shí)、持續(xù)監(jiān)控；注意應(yīng)基于參數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分布類(lèi)型的不同需要，對(duì)應(yīng)選擇適宜的統(tǒng)計(jì)分析工具，并根據(jù)趨勢(shì)情況做好相應(yīng)的分析(如對(duì)在一定時(shí)期內(nèi)是否受流行性疾病的影響而導(dǎo)致過(guò)程控制中CQA異常、供者材料采集數(shù)據(jù)趨勢(shì)等進(jìn)行分析)。
無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)
無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)的要點(diǎn)與檢查典型問(wèn)題在之前的研究中已進(jìn)行了分析，要點(diǎn)包括無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)的范圍剛好覆蓋無(wú)菌操作全過(guò)程、影響無(wú)菌性的關(guān)鍵生產(chǎn)步驟應(yīng)盡可能與實(shí)際無(wú)菌生產(chǎn)工藝相一致、根據(jù)產(chǎn)品的不同劑型及其工藝特點(diǎn)進(jìn)行設(shè)計(jì)(包括干預(yù)、最差條件、模擬試驗(yàn)方法等)，核心是體現(xiàn)該產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝對(duì)非最終滅菌藥品的無(wú)菌保證能力[15]。在CAR-T產(chǎn)品的生產(chǎn)中，無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)需要特殊考慮的內(nèi)容主要包括以下4點(diǎn)。
當(dāng)同一生產(chǎn)區(qū)域存在多條相同生產(chǎn)線(生產(chǎn)單元)或相同生產(chǎn)設(shè)備時(shí)，由于生產(chǎn)操作與處理流程基本是相似的，其首次無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)可以結(jié)合產(chǎn)能驗(yàn)證的要求，科學(xué)、合理地進(jìn)行設(shè)計(jì)，確保每班次連續(xù)進(jìn)行3次合格試驗(yàn)，其中注意對(duì)全部生產(chǎn)單元/生產(chǎn)設(shè)備的覆蓋與“班次”[16]的正確理解，并重點(diǎn)集中在非封閉操作和與封閉系統(tǒng)連接有關(guān)的步驟上。
在完成首次驗(yàn)證后，宜采用矩陣法和/或括號(hào)法進(jìn)行持續(xù)確認(rèn)(不低于每6個(gè)月1次)，其中應(yīng)特別注意矩陣法和/或括號(hào)法設(shè)計(jì)的合理性與代表性。
關(guān)注細(xì)胞采集運(yùn)輸、病毒載體生產(chǎn)、質(zhì)粒生產(chǎn)等環(huán)節(jié)的無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)的開(kāi)展或評(píng)估，必要時(shí)可考慮采用分階段模擬的方式。
結(jié)合當(dāng)前CAR-T產(chǎn)品的特點(diǎn)(如超小的批次規(guī)模、大量的人工手動(dòng)無(wú)菌操作、較長(zhǎng)時(shí)間的無(wú)菌狀態(tài)維持、多個(gè)相似或一致的生產(chǎn)單元與生產(chǎn)設(shè)備、廠房設(shè)計(jì)與布局的差異性、生產(chǎn)工藝的多樣性等)，基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理原則進(jìn)行無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)關(guān)鍵點(diǎn)的識(shí)別與設(shè)計(jì)，如人員的無(wú)菌操作考核與確認(rèn)、無(wú)菌連接、非密閉狀態(tài)最長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間、特殊設(shè)計(jì)的一次性使用容器。考慮到當(dāng)前CAR-T產(chǎn)品與傳統(tǒng)無(wú)菌藥品在無(wú)菌操作方面存在顯著差異，在符合當(dāng)前法規(guī)規(guī)定的前提下，基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理方法，可適當(dāng)考慮合理的靈活度。
污染與交叉污染控制
傳統(tǒng)的生物制品通常可采用除菌過(guò)濾來(lái)去除微生物，但目前沒(méi)有適用于CAR-T產(chǎn)品的終端滅菌或除菌過(guò)濾方法。因此，為保證工藝全程的無(wú)菌，污染控制變得尤為重要。需要從影響藥品質(zhì)量的六要素(人員、設(shè)備與組件、設(shè)施環(huán)境、物料、工藝過(guò)程、檢測(cè)與預(yù)防)入手，制定并實(shí)施有效的污染控制策略[17]。與傳統(tǒng)生物制品相比，CAR-T產(chǎn)品的污染控制策略需要更加重視的內(nèi)容主要包括以下6點(diǎn)。
人員方面，CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)依賴(lài)大量的人工無(wú)菌操作，需要特別關(guān)注人員的無(wú)菌操作培訓(xùn)、考核與資質(zhì)確認(rèn)(包括更衣確認(rèn)、參與無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)并測(cè)試合格等)；配備適宜的無(wú)菌操作防護(hù)設(shè)備(如護(hù)目鏡、潔凈服、無(wú)菌手套、無(wú)菌袖套等)；基于生產(chǎn)操作需要，明確并細(xì)化主要操作人員和次要(或輔助)操作人員的職責(zé)與無(wú)菌操作要求等[18]。
設(shè)備與組件方面，CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)的許多設(shè)備是基于產(chǎn)品生產(chǎn)需求預(yù)先設(shè)計(jì)的，其中包括大量的一次性使用系統(tǒng)，需要考慮對(duì)一次性使用系統(tǒng)污染及完整性的評(píng)估與確認(rèn)。同時(shí)，由于一次性連接技術(shù)貫穿于CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)全過(guò)程，對(duì)于無(wú)菌連接器(如AseptiQuik、Opta)、無(wú)菌焊接或在A級(jí)環(huán)境下的開(kāi)放式連接(如Luer和MPC接頭)等的選擇、確認(rèn)與使用，是CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)污染控制策略中不可忽視的環(huán)節(jié)。
設(shè)施環(huán)境方面，在遵循常規(guī)GMP要求的基礎(chǔ)上，需要基于CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)中大量人工無(wú)菌操作的特點(diǎn)進(jìn)行設(shè)計(jì)，如足夠的操作空間、暴露性操作均在B級(jí)背景下的A級(jí)層流(生物安全柜)的初始?xì)饬骰蚋綦x器條件下完成、不同品種或不同批次產(chǎn)品在同一區(qū)域生產(chǎn)的要求。其中，環(huán)境監(jiān)測(cè)要點(diǎn)同樣包括環(huán)境監(jiān)測(cè)程序規(guī)定、監(jiān)測(cè)計(jì)劃和監(jiān)測(cè)實(shí)施3個(gè)方面[19]，但值得注意的是，由于CAR-T產(chǎn)品無(wú)菌操作的空間相對(duì)較小，環(huán)境監(jiān)測(cè)需要避免監(jiān)測(cè)操作本身對(duì)環(huán)境與生產(chǎn)操作產(chǎn)生的不利影響。同時(shí)，注意對(duì)于涉及傳染病病原體的情況，需使用獨(dú)立的專(zhuān)用生產(chǎn)區(qū)域(如陽(yáng)性車(chē)間)并符合生物安全方面的有關(guān)要求，在病毒載體生產(chǎn)中注意“有毒區(qū)”和“無(wú)毒區(qū)”的隔離設(shè)計(jì)。設(shè)計(jì)時(shí)，注意不能忽略消毒劑、培養(yǎng)基等配制及滅菌所需的功能區(qū)域。
物料方面，由于CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)所用的部分物料來(lái)自人體或動(dòng)物(如白蛋白、培養(yǎng)基)，需要特別關(guān)注病毒、動(dòng)物源可傳染性海綿狀腦病等的潛在污染，并關(guān)注境外遠(yuǎn)程進(jìn)口物料在運(yùn)輸過(guò)程及轉(zhuǎn)入潔凈區(qū)時(shí)污染控制措施的有效性。
工藝過(guò)程方面，重點(diǎn)是科學(xué)、有效的無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)，以及過(guò)程中合理的污染監(jiān)控指標(biāo)。
檢測(cè)與預(yù)防方面，注意盡量在早期階段進(jìn)行檢測(cè)，避免后期復(fù)雜的調(diào)查以及對(duì)患者可及性的影響。比如在單采血靜脈穿刺過(guò)程中若發(fā)生皮膚消毒不徹底、患者現(xiàn)有感染等情況，需要在采集后及接收時(shí)進(jìn)行必要的無(wú)菌測(cè)試，提前發(fā)現(xiàn)潛在污染。因活細(xì)胞制品生產(chǎn)周期和患者治療窗口期的特殊性，可能會(huì)應(yīng)用快速檢測(cè)方法(如快速無(wú)菌檢查、快速支原體檢查)，其應(yīng)用時(shí)，僅依據(jù)小批量生產(chǎn)數(shù)據(jù)尚不能證明使用快速檢測(cè)進(jìn)行批量放行的有效性，因此必須嚴(yán)格執(zhí)行兩步放行要求，并加強(qiáng)對(duì)生產(chǎn)全過(guò)程污染控制措施有效性的監(jiān)測(cè)。
生產(chǎn)相關(guān)的偏差處理與變更控制
在藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理中，偏差處理與變更控制的基本要求與原則是一致的，但由于CAR-T產(chǎn)品生產(chǎn)的特殊性，導(dǎo)致其在生產(chǎn)系統(tǒng)中存在某些特殊的情形。對(duì)于自體CAR-T產(chǎn)品，患者年齡、健康狀況、疾病分期、既往治療史、體質(zhì)量等因素存在差異，可能影響起始細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量，或由于供體細(xì)胞已經(jīng)耗盡或者經(jīng)多輪化療導(dǎo)致細(xì)胞難以轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而影響CAR-T產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程，造成生產(chǎn)偏差。因此，對(duì)偏差的調(diào)查需要嚴(yán)格按程序執(zhí)行。偏差分析中，應(yīng)注意結(jié)合細(xì)胞治療產(chǎn)品的特殊性，進(jìn)行偏差影響評(píng)估與根本原因分析，并制定有效的糾正與預(yù)防措施。在變更控制的分級(jí)方面，應(yīng)注意區(qū)別GMP與注冊(cè)審評(píng)技術(shù)指導(dǎo)原則對(duì)不同級(jí)別變更定義與范圍的差異，并在變更控制程序中予以明確(如一些生產(chǎn)質(zhì)量管理方面的主要變更實(shí)際不涉及任何注冊(cè)審評(píng)事項(xiàng))，同時(shí)注意變更控制中的一些常規(guī)關(guān)注要點(diǎn)，如：變更的定義、適用范圍、分類(lèi)、處理流程、影響評(píng)估、控制措施、措施跟蹤、編號(hào)與臺(tái)賬管理、定期分析等[20]。其中，注意加強(qiáng)對(duì)工藝優(yōu)化、新增生產(chǎn)單元/生產(chǎn)線、工藝時(shí)間延長(zhǎng)、生產(chǎn)工藝參數(shù)調(diào)整(核準(zhǔn)范圍內(nèi))、產(chǎn)能變化等特殊變更的控制。
結(jié)語(yǔ)
在細(xì)胞治療產(chǎn)品業(yè)內(nèi)，經(jīng)常提及“過(guò)程即產(chǎn)品”。這種描述高度概況了細(xì)胞治療產(chǎn)品來(lái)自生產(chǎn)系統(tǒng)的考驗(yàn)。一個(gè)有效的生產(chǎn)系統(tǒng)可以降低潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)并確保產(chǎn)品符合相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)，在保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，還有助于提高生產(chǎn)效率，從而為持續(xù)改進(jìn)和發(fā)展奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。本文主要基于細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)系統(tǒng)的特殊性進(jìn)行分析，提出了當(dāng)前細(xì)胞治療產(chǎn)品在生產(chǎn)質(zhì)量管理中六大系統(tǒng)之一的生產(chǎn)系統(tǒng)方面需要重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容與要點(diǎn)，為我國(guó)細(xì)胞治療行業(yè)更好地開(kāi)展有關(guān)工作提供參考，也希望為各類(lèi)藥品檢查、企業(yè)質(zhì)量審計(jì)(外審或內(nèi)審)提供借鑒。
本文內(nèi)容主要立足于現(xiàn)有經(jīng)驗(yàn)與認(rèn)知，隨著細(xì)胞治療產(chǎn)品科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，行業(yè)經(jīng)驗(yàn)與認(rèn)知的進(jìn)一步深入(如新靶點(diǎn)挖掘、細(xì)胞活化/清除開(kāi)關(guān)應(yīng)用、復(fù)合型CAR-T和通用型CAR-T構(gòu)建等[1])，部分內(nèi)容可能不適用于新技術(shù)、新業(yè)態(tài)，但關(guān)于生產(chǎn)系統(tǒng)質(zhì)量管理的目的與基本理念是一致的。以當(dāng)前研發(fā)進(jìn)度較快的通用型CAR-T產(chǎn)品為例，與當(dāng)前獲批的自體CAR-T產(chǎn)品相比，未來(lái)通用型CAR-T產(chǎn)品具有可立即獲得、更加標(biāo)準(zhǔn)化和成本更低等方面的優(yōu)勢(shì)，但也存在更多的安全性問(wèn)題，如供體血液中外源因子感染、移植物抗宿主病、異體細(xì)胞的排斥反應(yīng)等，其生產(chǎn)系統(tǒng)質(zhì)量管理的核心內(nèi)容與目的仍是最大限度地避免生產(chǎn)過(guò)程中的污染/交叉污染、混淆與差錯(cuò)，保證生產(chǎn)過(guò)程處于持續(xù)穩(wěn)定的狀態(tài)，進(jìn)而保證藥品質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：
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