3.1 通則1105 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法

引言部分（適用范圍、環(huán)境要求等）：

2020版： “本法系用于在有氧條件下測定非無菌產(chǎn)品中可存活微生物（細菌總數(shù)和真菌總數(shù)）的數(shù)量。本法不適用于活菌制劑的計數(shù)，除非另有規(guī)定。微生物計數(shù)試驗環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢驗全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。潔凈空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期進行監(jiān)測?！?/span>

2025版： “微生物計數(shù)法系用于在有氧條件下生長嗜溫細菌和 真菌的計數(shù)。本法適用于檢查非無菌制劑及原、輔料等是否符合規(guī)定的 微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)按以下規(guī)定進行檢驗，包括供試品的 取樣量和結(jié)果的判斷等。除另有規(guī)定外，本法不適用于活菌 制劑的檢查。微生物計數(shù)試驗環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢 驗全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污 染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。潔凈空氣區(qū)域、 工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期進行監(jiān)測。”

差異分析： 2025版在第一句話的表述上更為具體，將“可存活微生物（細菌總數(shù)和真菌總數(shù)）的數(shù)量”細化為“嗜溫細菌和 真菌的計數(shù)”，并在第二句話增加了“本法適用于檢查非無菌制劑及原、輔料等是否符合規(guī)定的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)按以下規(guī)定進行檢驗，包括供試品的 取樣量和結(jié)果的判斷等”的說明。其他關(guān)于不適用范圍、環(huán)境要求、無菌操作、防止污染的描述完全一致。這些變化是對適用范圍和目的的進一步明確和補充，并未改變方法的原理和核心要求。

判斷： 非實質(zhì)性變化

[A2]

方法適用范圍和基本要求： 對比結(jié)果顯示，兩個版本在方法適用范圍（嗜溫細菌和真菌計數(shù)）、不適用范圍（活菌制劑，除非另有規(guī)定）、試驗環(huán)境要求、無菌操作、防止污染的措施不影響檢出、潔凈區(qū)域監(jiān)控等方面的描述完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

供試品抗菌活性去除或中和： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求盡可能去除或中和供試品抗菌活性，并強調(diào)需確認(rèn)中和劑或滅活劑的有效性和對微生物無毒性。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

表面活性劑的使用： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求確認(rèn)供試液制備中使用的表面活性劑對微生物無毒性以及與中和劑或滅活劑的相容性。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

計數(shù)方法： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均列出了平皿法、薄膜過濾法和最可能數(shù)法（MPN法）三種計數(shù)方法，并說明了MPN法的特點和適用性。均強調(diào)應(yīng)根據(jù)供試品特性和標(biāo)準(zhǔn)選擇方法，并需確認(rèn)適用性。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

培養(yǎng)基適用性檢查和計數(shù)方法適用性試驗： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求進行計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和供試品計數(shù)方法適用性試驗，以確認(rèn)方法適用于該產(chǎn)品。均要求在檢驗程序或產(chǎn)品變化時重新進行適用性試驗。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

菌種及菌液制備： 對比結(jié)果顯示，兩個版本對試驗用菌株傳代次數(shù)（不超過5代）和保存技術(shù)的要求一致。對菌液制備后不同保存條件（室溫2小時內(nèi)，2-8℃ 24小時內(nèi)）下的使用時限規(guī)定一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

陰性對照（適用性試驗部分）： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求進行陰性對照試驗以確認(rèn)試驗條件，要求無菌生長，并規(guī)定有菌生長時應(yīng)進行偏差調(diào)查。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

培養(yǎng)基適用性檢查方法（1105計數(shù)）： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求對商品化預(yù)制、脫水或配制培養(yǎng)基進行適用性檢查。規(guī)定了接種量（不大于100cfu）、使用的培養(yǎng)基種類（TSB液體、TSA、SDA平板）、平行數(shù)量（2管或2平板），與對照培養(yǎng)基對比，以及固體培養(yǎng)基菌落數(shù)比值（0.5-2范圍內(nèi)且形態(tài)一致）和液體培養(yǎng)基生長良好作為判定標(biāo)準(zhǔn)。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

計數(shù)方法適用性試驗 – 供試液制備： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均規(guī)定根據(jù)供試品理化和生物學(xué)特性選擇適宜方法制備供試液，加熱溫度不超45℃，制備到接種不超1小時。列舉了水溶性、水不溶性非油脂類、油脂類、膜劑、腸溶及結(jié)腸溶制劑、氣霧劑、貼劑/貼膏劑等不同劑型的常用制備方法。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

計數(shù)方法適用性試驗 – 接種和稀釋： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求按表1規(guī)定和要求進行接種和稀釋，加入菌液體積不超供試液體積1%，優(yōu)先選擇最低稀釋級。規(guī)定了試驗組、供試品對照組、菌液對照組的設(shè)置和操作。對抗菌活性或溶解性差供試品進一步處理的要求也一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

計數(shù)方法適用性試驗 – 抗菌活性的去除或滅活： 對比結(jié)果顯示，兩個版本判斷抑菌活性的標(biāo)準(zhǔn)一致（試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值小于菌液對照組菌落數(shù)值的50%）。列出的四種消除抑菌活性的方法一致（增加稀釋液/培養(yǎng)基體積、加中和劑/滅活劑、薄膜過濾、聯(lián)合使用）。對使用中和劑/滅活劑的要求和對照組判定標(biāo)準(zhǔn)（0.5-2范圍）一致。對無法消除抑菌活性的處理原則也一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

計數(shù)方法適用性試驗 – 供試品中微生物的回收： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求對表1試驗菌逐一進行回收試驗，可采用平皿法、薄膜過濾法或MPN法。

平皿法（傾注法和涂布法）： 對比結(jié)果顯示，傾注法的具體操作步驟（供試液體積、培養(yǎng)基用量、混勻、凝固、培養(yǎng)）和要求一致。涂布法的操作步驟（培養(yǎng)基用量、制板、表面干燥、接種量、培養(yǎng)）和要求一致。兩者都要求每株試驗菌每種培養(yǎng)基至少制備2個平皿，并測定對照組菌數(shù)計算平均值。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

薄膜過濾法： 對比結(jié)果顯示，對濾膜孔徑（不大于0.45μm）、直徑（一般50mm）、沖洗量調(diào)整、材質(zhì)影響、濾器濾膜滅菌和完整性、不同類型供試品過濾前處理、沖洗液用量和總量限制（每次100ml，總不超500ml，最多不超1000ml）、過濾后濾膜轉(zhuǎn)移到相應(yīng)培養(yǎng)基的要求（需氧菌用TSA，霉菌酵母用SDA）、培養(yǎng)和計數(shù)方法（同平皿法）、每張濾膜菌落數(shù)上限（不超100cfu）、每株試驗菌每種培養(yǎng)基至少一張濾膜、測定對照組菌數(shù)等要求和操作描述完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

MPN法： 對比結(jié)果顯示，兩個版本關(guān)于MPN法的適用范圍、操作步驟（連續(xù)稀釋級數(shù)至少3個，每級3份1ml接種TSB液體培養(yǎng)基）、對照組測定、必要時加入成分、培養(yǎng)條件（30-35℃不超過3天，逐日觀察）、結(jié)果難以判斷時的轉(zhuǎn)種方法、根據(jù)生長管數(shù)查表3最可能數(shù)等描述完全一致。表3（最可能數(shù)）內(nèi)容也一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

計數(shù)方法適用性試驗 – 結(jié)果判斷： 對比結(jié)果顯示，兩個版本對平皿法或薄膜過濾法適用性判定標(biāo)準(zhǔn)（試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值在0.5-2范圍內(nèi)）和MPN法判定標(biāo)準(zhǔn)（試驗組菌數(shù)在菌液對照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)）一致。對回收試驗合格后進行供試品檢查的規(guī)定一致。對回收不達要求時選擇回收最接近要求的方法和試驗條件進行檢查的原則也一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

供試品檢查 – 檢驗量： 對比結(jié)果顯示，兩個版本對檢驗量的定義一致。一般檢驗量（10g或10ml，膜劑/貼劑100cm2）和抽樣數(shù)量（不少于2個最小包裝，大蜜丸不少于4丸，膜劑/貼劑不少于4片）的規(guī)定一致。對貴重藥品、微量包裝、活性物質(zhì)含量低的制劑以及樣品量有限或批產(chǎn)量極小的活性物質(zhì)等特殊情況的檢驗量規(guī)定，對比發(fā)現(xiàn)2025版截圖覆蓋的內(nèi)容與2020版文字完全一致。分析判斷： 在對比范圍內(nèi)，本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

供試品檢查 – 供試品的檢查方法： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均規(guī)定按適用性試驗確認(rèn)的方法測定需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)。指明了測定不同總數(shù)使用的培養(yǎng)基（需氧菌用TSA/TSB，霉菌酵母用SDA）。要求進行陰性對照試驗，要求無菌生長，如有菌生長需調(diào)查偏差。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

供試品檢查 – 平皿法（培養(yǎng)和計數(shù)，菌數(shù)報告規(guī)則）：

[A1]總則 (制備供試液和接種)完全一致。培養(yǎng)和計數(shù)完全一致。菌數(shù)報告規(guī)則在對選取稀釋級菌落數(shù)范圍的推薦值上存在差異：

• 2020年版推薦選取需氧菌總數(shù)平均菌落數(shù)小于 300cfu 的稀釋級。
• 2025年版推薦選取需氧菌總數(shù)平均菌落數(shù)小于 250cfu 的稀釋級。
• 2020年版推薦選取霉菌和酵母菌總數(shù)平均菌落數(shù)小于 100cfu 的稀釋級。
• 2025年版推薦選取霉菌和酵母菌總數(shù)平均菌落數(shù)小于 50cfu 的稀釋級。

其他關(guān)于報告依據(jù)、計算方法（取最高平均菌落數(shù)，計算每g/ml/cm3的微生物數(shù)，取兩位有效數(shù)字）以及對低菌數(shù)和無菌的報告方式的描述在兩個版本中是完全一致的。

分析判斷：

在供試品檢查的平皿法中，兩個版本在制備供試液和接種、培養(yǎng)和計數(shù)（包括培養(yǎng)條件、計數(shù)要求、菌落蔓延處理和雙平板差異判定）等核心操作步驟和要求上是完全一致的。唯一的區(qū)別在于“菌數(shù)報告規(guī)則”中對于推薦選取用于計數(shù)的稀釋級平板的菌落數(shù)范圍。2025版將推薦的上限從300cfu（需氧菌）和100cfu（霉菌酵母）分別調(diào)整到了250cfu和50cfu。

這一調(diào)整是為了更精確地計數(shù)。當(dāng)平板上的菌落過多時，菌落之間容易重疊，導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果偏低（即發(fā)生菌落蔓延或計數(shù)困難）。通過降低推薦計數(shù)的菌落數(shù)上限，可以更好地避免這類問題，從而提高計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

需要注意的是，兩個版本都使用了“宜選取”這個詞，表明這是一種推薦的最佳實踐，而非強制要求。在沒有符合推薦范圍的平板可計數(shù)時，仍然需要根據(jù)其他規(guī)定（如菌落蔓延不能計數(shù)，雙平板差異等）選擇合適的稀釋級進行計數(shù)和報告。

因此，將推薦的計數(shù)范圍收窄，是基于微生物計數(shù)準(zhǔn)確性考慮的一種方法優(yōu)化和完善，它并沒有改變平皿計數(shù)的原理、基本操作步驟、計算方法或最終結(jié)果的表達形式。實驗室需要調(diào)整選取計數(shù)平板時的偏好，但不需要改變核心的檢驗技能、設(shè)備或數(shù)據(jù)處理方式（除了選取數(shù)據(jù)）。

基于對藥典原文的對比和對檢驗方法的理解，在供試品檢查的平皿法中，修改推薦的計數(shù)范圍是一個非實質(zhì)性變化。[A1]

供試品檢查 – 薄膜過濾法（制備、培養(yǎng)計數(shù)、報告）：

[A4]

2020年版文字： 在1105通則“供試品檢查 – 薄膜過濾法”的“培養(yǎng)和計數(shù)”小節(jié)中，詳細規(guī)定了培養(yǎng)條件和計數(shù)方法同平皿法，并明確指出“每張濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過100cfu?！?以及菌數(shù)報告規(guī)則（無菌時的報告方式）。

2025年版： 在2025年版該部分的描述中，規(guī)定了培養(yǎng)條件和計數(shù)方法同平皿法。但是，文字中省略了“每張濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過100cfu?！边@一明確的限制性規(guī)定。其他關(guān)于供試液制備、取樣量、過濾、沖洗、濾膜轉(zhuǎn)移等前續(xù)步驟在兩個版本中是基本一致的。

差異分析：

盡管2025版仍然要求計數(shù)方法同平皿法，但平皿法的計數(shù)原則（如推薦計數(shù)范圍）并不能完全替代薄膜過濾法針對膜表面計數(shù)的特定要求。移除這一明確上限，可能導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果的主觀性增加和準(zhǔn)確性風(fēng)險提高。對薄膜過濾法的計數(shù)執(zhí)行和結(jié)果可靠性有顯著影響，構(gòu)成實質(zhì)性變化。

理論上，某些微生物或在特定基質(zhì)中，即使菌落數(shù)超過100cfu，如果菌落形態(tài)清晰且分布均勻，實驗室可能有能力進行相對準(zhǔn)確的計數(shù)。移除硬性上限，允許實驗室根據(jù)自身驗證數(shù)據(jù)和風(fēng)險評估來確定更適合其產(chǎn)品和方法的計數(shù)范圍。此變化可能希望實驗室將平皿法中的計數(shù)原則（如選擇合適的稀釋級進行計數(shù)，避免計數(shù)困難的平板等）更普遍地應(yīng)用于薄膜過濾法，而不局限于一個數(shù)值。這一變化可能導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果的主觀性和變異性增加，對實驗室的質(zhì)量控制體系、方法驗證和SOP管理提出了更高的要求。

[A4]

供試品檢查 – MPN法： 對比結(jié)果顯示，兩個版本對MPN法供試液制備、接種、培養(yǎng)條件（30-35℃ 3-5天）、確認(rèn)生長方法、記錄生長管數(shù)、從表3查最可能數(shù)等描述完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

結(jié)果判斷（1105總則）： 對比結(jié)果顯示，兩個版本對需氧菌總數(shù)和霉菌酵母總數(shù)的定義（包含異類微生物菌落）、沙氏葡萄糖瓊脂上細菌影響計數(shù)時的處理方法（使用含抗生素或其他選擇性培養(yǎng)基）和選擇性培養(yǎng)基適用性檢查要求、MPN法測定結(jié)果、微生物限度標(biāo)準(zhǔn)的解釋（101cfu為20，102cfu為200等）、合格判定的標(biāo)準(zhǔn)（總數(shù)均符合規(guī)定）等描述完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

稀釋液、沖洗液及培養(yǎng)基（1105引用）： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均指明參見通則1106的相關(guān)規(guī)定。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

3.2 通則1106 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法

方法適用范圍和基本要求： 對比結(jié)果顯示，兩個版本對控制菌檢查法用于檢查特定微生物、適用于非無菌制劑及其原輔料、對檢出控制菌或其他致病菌按一次結(jié)果為準(zhǔn)不再復(fù)試的規(guī)定一致（盡管2025版截圖未完全覆蓋此句，但基本原則未變）。供試液制備及實驗環(huán)境要求同1105的引用也一致。抗菌活性去除/中和和表面活性劑使用的注意事項也與1105中的要求一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容基本一致，無實質(zhì)性變化。

培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求進行培養(yǎng)基適用性檢查和方法適用性試驗，并在程序或產(chǎn)品變化時重做。對培養(yǎng)基適用性檢查的項目（促生長、抑制、指示特性）、具體檢查方法（液體/固體培養(yǎng)基促生長、抑制、指示特性）和判定標(biāo)準(zhǔn)，以及所用菌株參見表1的要求完全一致。對方法適用性試驗的供試液制備引用、試驗菌選擇（包括耐膽鹽革蘭陰性菌的試驗菌）、具體操作步驟（直接接種或薄膜過濾加菌）、培養(yǎng)條件和判定標(biāo)準(zhǔn)（能檢出相應(yīng)反應(yīng)特征）也完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

菌種及菌液制備： 對比結(jié)果顯示，兩個版本對試驗用菌株傳代次數(shù)（不超過5代）和保存技術(shù)的要求一致，列出的控制菌試驗菌種清單（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、白色念珠菌、生孢梭菌）一致。菌液制備方法（不同菌種的培養(yǎng)條件、稀釋液制備）和菌液保存時間/條件（室溫2小時內(nèi)，2-8℃ 24小時內(nèi)，生孢梭菌孢子懸液2-8℃驗證期內(nèi)）也完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

陰性對照（1106總則）： 對比結(jié)果顯示，兩個版本要求進行陰性對照試驗以確認(rèn)試驗條件，應(yīng)無菌生長，如有菌生長需調(diào)查偏差。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

控制菌檢查方法適用性試驗 – 結(jié)果判斷： 對比結(jié)果顯示，兩個版本關(guān)于適用性試驗結(jié)果判斷的原則一致，檢出試驗菌則按此方法進行檢查，未檢出需消除抑菌活性后重試，抑菌無法消除時選擇抑菌消除相對徹底的方法進行檢查。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

供試品檢查： 對比結(jié)果顯示，兩個版本均規(guī)定按適用性試驗確認(rèn)的方法進行檢查。陽性對照試驗（方法同供試品檢查，加菌量不超100cfu，應(yīng)檢出）和陰性對照試驗（稀釋劑代替供試液，應(yīng)無菌生長，有菌需調(diào)查）的要求、操作和判定標(biāo)準(zhǔn)完全一致。

[A3] 在2025年版中，在原有的上述描述之前，新增了一段重要的表述：“實驗室應(yīng)基于質(zhì)量風(fēng)險管理的要求，根據(jù)產(chǎn)品特性、方法適用性試驗結(jié)果、人員技能與經(jīng)驗、數(shù)據(jù)可靠性、污染控制措施和實驗室質(zhì)量控制水平等因 素，綜合評估確定日常檢驗過程中陽性對照試驗的必要 性、頻次及其他要求?！边@段新增的文字明確要求實驗室在進行日?？刂凭鷻z驗時，需要基于質(zhì)量風(fēng)險管理的原則，綜合考慮多種因素（產(chǎn)品特性、方法驗證結(jié)果、人員經(jīng)驗、數(shù)據(jù)可靠性、污染控制措施、實驗室質(zhì)量控制水平等），來評估確定陽性對照試驗的必要性、頻次以及其他要求。而2020年版僅規(guī)定了陽性對照試驗的操作方法和結(jié)果要求，沒有提及風(fēng)險管理和頻率確定的原則。

分析判斷： 這是一處實質(zhì)性變化：

• 改變了質(zhì)量控制策略的導(dǎo)向：

   這種變化代表了質(zhì)量控制策略從相對固定的操作要求轉(zhuǎn)向了更加注重基于風(fēng)險的評估和決策。

• 引入了風(fēng)險管理原則：

   2025年版明確將質(zhì)量風(fēng)險管理引入日常檢驗過程中陽性對照的設(shè)計和執(zhí)行中。

• 賦予實驗室確定頻率的靈活性：

   2025版不再（像2020版可能隱式推導(dǎo)的那樣）要求每次供試品檢查都必須同時進行陽性對照，而是允許實驗室根據(jù)風(fēng)險評估的結(jié)果，自主確定日常檢驗中陽性對照的必要性和執(zhí)行頻次。

2025年版藥典明確了在日?？刂凭鷻z查中，需要考慮陽性對照的風(fēng)險性（以及其他因素），并通過風(fēng)險評估來確定其執(zhí)行的頻率，而不再是簡單地規(guī)定必須每次都做（或者不規(guī)定頻率，由實驗室自行摸索）。

此變化是否對具體的某個產(chǎn)品的測試方法造成了實質(zhì)性影響的分析：

• 具體產(chǎn)品的測試方法通常規(guī)定了如何對該產(chǎn)品進行樣品前處理、使用何種稀釋液和培養(yǎng)基、接種量和稀釋度、培養(yǎng)溫度和時間、如何觀察和計數(shù)菌落或判斷控制菌是否存在，以及如何計算和報告最終結(jié)果。這些是直接作用于樣品本身，產(chǎn)生檢驗數(shù)據(jù)的核心步驟。
• 2025年版新增的要求并沒有改變上述核心步驟。它沒有說要換培養(yǎng)基、改溫度、變稀釋比例、換計數(shù)原理，或者改變?nèi)绾闻袛鄻悠肥欠窈细竦臉?biāo)準(zhǔn)。它影響的是：
• 實驗室需要建立一個風(fēng)險評估的流程和文件。
• 根據(jù)這個流程，需要對每個具體產(chǎn)品進行評估來決定在日常檢驗中，多久（頻次）進行一次陽性對照試驗。
• 實驗室的文件（例如產(chǎn)品的檢驗規(guī)程）中，關(guān)于日常陽性對照的規(guī)定，可能會從“每次都做”或“未規(guī)定頻率”變成“按照[實驗室風(fēng)險評估SOP]確定的頻次進行，例如每周一次/每月一次等”。

“實質(zhì)性影響”通常指的是對檢驗方法的原理、核心操作、關(guān)鍵參數(shù)或結(jié)果判斷的準(zhǔn)確性/可靠性產(chǎn)生顯著改變。例如，如果藥典要求從平皿法改成更靈敏的PCR法，這就是實質(zhì)性影響；如果要求培養(yǎng)溫度從30-35℃改成20-25℃，這也可能影響特定菌的生長，是實質(zhì)性影響。而2025年版新增的陽性對照要求，是關(guān)于圍繞核心檢測步驟的質(zhì)量控制策略的改變。它影響的是何時執(zhí)行一個輔助性的質(zhì)量控制檢查（陽性對照），而不是改變執(zhí)行主要的樣品分析步驟本身。陽性對照的目的是驗證方法在樣品基質(zhì)中的回收能力，確保主要檢測結(jié)果的可靠性，但它本身不是產(chǎn)生樣品主要檢測結(jié)果（如總菌數(shù)是多少）的步驟。

因此，2025年版通則1106在“供試品檢查 – 陽性對照試驗”中新增的關(guān)于基于風(fēng)險管理確定日常陽性對照頻率的要求，是對實驗室質(zhì)量管理體系和日常檢驗質(zhì)量控制策略的實質(zhì)性影響和要求的提高。從具體產(chǎn)品檢驗方法的文件和管理層面看，需要更新文件，可能是實質(zhì)性工作量的增加。從具體產(chǎn)品檢驗方法的核心分析步驟層面看，該要求本身不直接改變樣品如何被處理和檢測以獲得主要結(jié)果，不構(gòu)成對核心分析步驟的實質(zhì)性影響。

即使核心檢驗方法（如1105和1106的基本原理和操作步驟）在2025版中沒有發(fā)生實質(zhì)性變化，但作為依據(jù)新版藥典提供檢驗服務(wù)的第三方實驗室，需要證明其所使用的方法是符合并適用于2025年版藥典要求的。這通常意味著需要對所檢測的每種產(chǎn)品類型（或代表性產(chǎn)品）進行方法適用性驗證（如果之前未做過）或再驗證（如果之前是依據(jù)2020版驗證的）。這個驗證過程需要依據(jù)2025年版通則1105和1106的要求進行，包括進行陽性對照試驗以確認(rèn)方法在特定產(chǎn)品基質(zhì)中的回收能力。雖然核心技術(shù)本身變化不大，但藥典版本的更新是官方標(biāo)準(zhǔn)的變更，實驗室需要證明其能力符合當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)。特別是2025版1106中明確要求日常陽性對照頻率基于風(fēng)險管理確定，這也要求實驗室在更新到2025版時，需要在方法驗證或再驗證的基礎(chǔ)上，建立并執(zhí)行這個風(fēng)險評估過程，來確定今后日常檢驗中陽性對照的執(zhí)行策略。[A3]

耐膽鹽革蘭陰性菌檢查： 對比結(jié)果顯示，供試液制備和預(yù)培養(yǎng)（稀釋劑、比例、培養(yǎng)溫度時間）、定性試驗（增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、無菌落判未檢出）、定量試驗（取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、結(jié)果判斷（根據(jù)平板生長判斷培養(yǎng)管陽性陰性，查表2最可能菌數(shù)）等所有步驟、條件和判斷標(biāo)準(zhǔn)完全一致。表2（MPN法最可能數(shù)）內(nèi)容也一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

大腸埃希菌檢查： 對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（供試液制備引用、取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（增菌培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移、選擇培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、選擇瓊脂平板、培養(yǎng)條件）、結(jié)果判斷（平板生長需鑒定確證，無生長或鑒定陰性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標(biāo)準(zhǔn)完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

沙門菌檢查： 對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（增菌培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移、選擇培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、分離培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、沙門菌在分離培養(yǎng)基上的菌落特征、疑似菌鑒定方法如三糖鐵瓊脂）等所有步驟、條件和描述完全一致。結(jié)果判斷（根據(jù)分離培養(yǎng)和平板/三糖鐵瓊脂反應(yīng)判斷是否需鑒定或判未檢出）也完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

銅綠假單胞菌檢查： 對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（引用1105、取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、菌落鑒定方法如氧化酶試驗）、氧化酶試驗方法（操作步驟、陽性判斷）、結(jié)果判斷（平板生長且氧化酶陽性需鑒定，無生長或鑒定陰性或氧化酶陰性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標(biāo)準(zhǔn)完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

金黃色葡萄球菌檢查： 對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（引用1105、取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、結(jié)果判斷（特定菌落特征需鑒定，無特征或鑒定陰性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標(biāo)準(zhǔn)完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

梭菌檢查： 對比結(jié)果顯示，供試液制備和熱處理（引用1105、取樣量、熱處理條件）、增菌、選擇和分離培養(yǎng)（熱處理和未熱處理供試液接種增菌培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)、涂抹接種哥倫比亞瓊脂、厭氧培養(yǎng)）、過氧化氫酶試驗（操作步驟、陽性判斷）、結(jié)果判斷（厭氧桿菌生長且過氧化氫酶陰性需鑒定，無生長或鑒定陰性或過氧化氫酶陽性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標(biāo)準(zhǔn)完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

白色念珠菌檢查： 對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（引用1105、取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、典型菌落特征、鑒定方法如顯色培養(yǎng)基）、結(jié)果判斷（疑似菌生長且顯色培養(yǎng)基陽性需鑒定，無生長或鑒定陰性或顯色培養(yǎng)基陰性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標(biāo)準(zhǔn)完全一致。分析判斷： 本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

稀釋液： 對比結(jié)果顯示，兩個版本關(guān)于稀釋液的總則（配制后驗證滅菌）一致。列出的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、pH6.8/7.2/7.6無菌磷酸鹽緩沖液、0.9%無菌氯化鈉溶液的制備方法和引用通則一致，允許加入表面活性劑/中和劑的規(guī)定也一致。分析判斷： 除了稀釋液列表的呈現(xiàn)方式調(diào)整（新增列出部分成分）外，允許使用的稀釋液種類和制備方法沒有改變，無實質(zhì)性變化。

培養(yǎng)基及其制備方法： 對比結(jié)果顯示，兩個版本關(guān)于培養(yǎng)基的總則（按處方制備或使用脫水培養(yǎng)基，配制后驗證滅菌）一致。列出的所有培養(yǎng)基（TSB, TSA, SDB, SDA, PDA, 玫瑰紅鈉瓊脂, 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基, 腸道菌增菌液體培養(yǎng)基, 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂, 麥康凱液體培養(yǎng)基, 麥康凱瓊脂, RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基, 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂, 三糖鐵瓊脂, 溴化十六烷基三甲銨瓊脂, 梭菌增菌培養(yǎng)基, 哥倫比亞瓊脂, 念珠菌顯色培養(yǎng)基）的名稱、處方組成、各成分含量、詳細制備方法、滅菌條件和注意事項等描述完全一致。

差異分析

溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基在滅菌后25℃的pH值要求從7.4±0.2調(diào)整為7.2±0.2。念珠菌顯色培養(yǎng)基在加熱后25℃的pH值要求從6.3±0.2調(diào)整為5.9±0.2。pH值是培養(yǎng)基最重要的理化性質(zhì)之一，它直接影響酶活性、營養(yǎng)物質(zhì)的溶解度、選擇性抑制劑的作用效果以及微生物的生長代謝。對于溴化十六烷基三甲銨瓊脂這種用于篩選和鑒別銅綠假單胞菌的選擇性培養(yǎng)基，pH值的微小變化可能影響其選擇性和促生長性。而顯色培養(yǎng)基通過特定的顯色底物在微生物酶的作用下產(chǎn)生顏色反應(yīng)，從而實現(xiàn)快速鑒別。pH值的變化會直接影響酶的活性和顯色反應(yīng)的效率及特異性，進而可能影響白色念珠菌或其他念珠菌屬微生物的顯色特征和鑒別準(zhǔn)確性。因此該變化屬于實質(zhì)性變化，將直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

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